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中药鉴定技术论文

中药鉴定技术论文范文第1篇

[关键词] 中药鉴定新技术;课程建设;教学实践;改革

[中图分类号] R927 [文献标识码] C [文章编号] 1674-4721(2012)12(a)-0137-03

《中药鉴定学》是高等中医院校中药学专业的主干课程,也是药物制剂、制药工程以及中药市场营销方向的重要课程,同时也是中医专业的选修课程。《中药鉴定学》是专门研究中药的来源、品种、质量、质量变化规律及中药资源可持续发展的应用科学。学科起源于古代,形成于20世纪70年代,从最初建立到成熟经历了几十年的历程。传统的中药四大鉴定法包括来源、性状、显微和理化鉴定,为解决中药材的真伪、优劣和安全性方面作出了重要贡献[1-2]。随着现代科学技术的发展,多学科及新技术的渗透,多种中药鉴定新技术和新方法应运而生,使中药鉴别和质量评价更加准确、有效,并推动其向标准化、高速化、信息化等方向发展,成为了多学科的汇集点[3]。

正是在这样的背景下,广州中医药大学近两年来的新开设了中药学及其相关专业的限选课程《中药鉴定新技术》,主要面向已经掌握了中药学相关专业基础的大四年级本科生讲授。由于课程内容的新颖性、涉及技术方法的先进性和实用性,因此深受学生的欢迎和学校的重视。当前国内其他中医药院校尚未开始该课程,更没有相关的专用教材,因此,如何才能建设好《中药鉴定新技术》这门课程,提高《中药鉴定新技术》的内容的针对性、实用性和有效性,一直以来都是相关教学人员面临的重要问题,同时也在教学工作中不断摸索教学内容和探讨有效的教学方法。

1 课程的建设

中药鉴定技术现代化是时展的要求,因此,在课程内容的设置上要尽量做到既体现现代学科发展的方向和水平,同时通过对学生的互动与调查,从有关市场就业等信息的反馈,了解中药学相关专业学生的实际需求和行业用人情况,在传统中药鉴定方法的基础上,选择对于完善中药鉴定的标准化和科学性有重要意义和发展前景的新技术作为重点讲授内容,如色谱法、光谱法、中药分子鉴定、毛细管电泳、X射线衍射、计算机图像分析等技术;并进行实验设计和综合性实验,使学生参与到教学实践中来。

现代中药鉴定新技术的发展,在形态组织鉴定新技术方面,采用组织体视图像分析,用CCD摄像机直接参与对标本进行采样,将采样的图像经格式的转化后,用特定的图像分析程序进行分析测定,将分别得到系列参数,尤其适合于混淆品种和近缘中药的真伪鉴别及其原植物分类。在理化分析新技术方面,主要采用了UV、IR、TLC、GC、HPLC、CD、NMR、MS以及各种联用技术,如GGMS、HPLGMS等,这些方法高效率地对中药的化学成分进行广泛深入地研究,可定性定量反映不同中药间的差异,对复方中药研究具有优势。近年来,现代生物技术的新理论和新技术不断地渗透到中药鉴定领域,DNA分子遗传标记技术在中药鉴定中得到越来越广泛的应用。另外,随着越来越多的新技术融入中药鉴定领域,使得工作中的实验数据向多元化、复杂化方向发展,计算机模式分类技术把中药样品的信息特征转化为计算机可接受的行列数据化矩阵,对中药进行模式分析。除上述各种技术外,热分析、电分析等化学、物理方法如X射线衍射分析技术、X射线荧光光谱技术等也被逐渐引入[4]。因此,在教学的目标和定位上,要求通过学习《中药鉴定新技术》,学生能够利用物理学、化学、热力学以及分子生物学等多学科的先进技术,从化学、基因、细胞、组织、器官等多层次、多角度来研究和鉴定中药,为中药鉴定学的发展提供新的思路、技术和方法。

《中药鉴定新技术》课程共36学时,内容设置包括:概论、紫外分光光谱技术及红外分光光谱技术在中药鉴定中的应用、薄层色谱技术在中药鉴定中的应用、气相色谱技术及毛细管电泳法在中药鉴定中的应用、分子生物学技术在中药鉴定中的应用、显微成像分析技术在中药鉴定中的应用、荧光光谱技术及X-射线衍射技术在中药鉴定中的应用、高效液相色谱技术在中药鉴定中的应用等8个章节,以及实验一:显微成像分析技术在中药鉴定中的应用;实验二:分子生物学技术在中药鉴定中的应用。在每一种新的鉴定技术介绍过程中,详细阐述了各新技术的概念、原理、研究现状与优势、具体操作步骤,应用范围与展望以及应用举例等几部分内容。

课程的内容充分整合了近年来相关教师的理论教学和实践教学经验的相关资料和经验,不仅开拓了学生的思维和视野,更有利于培养学生对大学四年理论知识的理解和综合运用能力,有利于提高学生的实际工作能力,为学生今后从事中药的真伪鉴别、品种整理、质量评价和开发应用打下坚实基础,具有显著的实际效益。

2 教学、科研、实验相结合,提高课程教学的学术水平

随着现代新技术、新方法的不断应用,大量现代研究信息的获取,中药鉴定学科也在不断地推陈出新,与时俱进,顺应时代的发展,为有效提高中药鉴定新技术的课程教学学术水平,必须充分将教学、科研、实验相结合。教师们必须经常进行自身知识的积累和更新,加强科研能力的培养,亲自参与到涉及有关新技术的实验和课题项目中,只有在科研过程中积累了丰富的经验和切身的体会,并将这些内容融入在课程的教学过程中,才可以使学生们能感同身受,更好地理解中药鉴定新技术的相关背景知识,最新进展。

通过对学生的问卷调查和互动,学生在听完第一次课后,通常会表现出来有浓厚的兴趣,因为他们觉得不是中药鉴定学课程的简单重复,而是更深层次地了解中药鉴定技术应用的广泛和无处不在的实用性。有些内容是原来中药鉴定学课程中未涉及到的。另一些实例可以证明,有些未选此门课的学生马上会到老师这里询问还能不能重新申报回到这个课程上来。

3 教学方法的创新

课程内容整合了教师的理论教学和科研实践经验,因此在授课时,教师结合自己的工作的亲身体会,可以很真切地用实例比较不同发展时期中药鉴定技术的发展特点。同时结合学生实际情况,可以从这门学科产生和发展历程的角度谈多学科交叉在中药鉴定学中的应用成果。所以,学生们乐于接受这样的教学方式。由于课程的内容相对比较灵活新颖,在教学方法上,也采取了多样的方式,如讨论式、讲座式、启发讨论式、对比分析法等等,并充分利用多媒体,加强直观教学,提高教学效果。配合相关章节,设计课外作业、学生实验操作、教师示教实验以及考核内容,充分调动学生自主学习的能力。

此外,在教学质量控制方面,由于传统的考试方式多采用闭卷,形式较单一,带有一定局限性,其内容不可能覆盖全部学习内容, 考试内容死记硬背的较多,综合分析的较少,且实践考核缺乏。考虑到大四年级学生的学科基础知识比较完善,以及本课程内容多样化、相对比较新颖的特点,我们采用多元化开放式考核模式,教师拟定考试范围,通过面试或请学生撰写实验设计、研究综述,结合平时和实验成绩,进行综合评定学生的实践和创新能力。

4 面向中药现代化,培养新世纪人才

现有任课教师分别具有不同专业背景,具有多学科交叉的优势。结合植物分类学、中药鉴定学、中药资源学、生态学、分子生物学等基础理论,分别从分子水平、细胞水平、个体水平和群体水平等不同层次研究药材资源的分布特点、种群现状、品种遗传行为、相近亲缘物种间及其种下不同农家栽培品种的鉴别,解决生药的品种鉴定和品质评价研究中所遇到的技术难题,为种质资源鉴定、良种选育、药材质量控制提供重要的科学依据。随着《中药鉴定新技术》课程的开展,与学术的互动也不断加强,不仅培养了紧密结合中药现代化发展特点的综合应用型人才,也培养了一大批相关科研人才、教师团队、教学人才和学术骨干,完善了有关学术论文和教材讲义;通过教师进修和培训,加强和扩大了与相关单位的学术交流。

5 存在问题分析

5.1 理论教学与实践教学和结合不足

《中药鉴定新技术》课程与学生将来走上工作岗位所从事的工作密切相关,因此,学生能主动、认真学习相关知识。但因课程学时数较少,并缺少最重要的实验环节,对相关新技术实际应用操作练习,学习内容仅停留在基本的理论知识上,学习方法仅仅为理解记忆,影响学习效果。如学校缺少X-射线衍射仪等部分仪器设备,教师自身也没做相关操作练习,在讲课过程中无法进入深入地阐述。学生在学习基本理论知识后,缺少对荧光光谱仪、X-射线衍射仪等相关仪器设备的实际操作练习。

5.2 讲授内容部分重叠

由于课程主要面向已经掌握了中药学相关专业基础的大四年级本科生讲授。教师讲授的内容与学生前期学习的理论知识可能有些会有重叠。因此在内容的选择和教学设计上要更有针对性和实用性。

5.3缺少相关可借鉴经验

当前国内其他中医药院校尚未开始该课程,课程的建设需要进行实践探索;前期由于缺少相关配套教材,从学生反映来看,普遍还是认为手上没有教材,光凭听课和老师给的大纲样的文字材料及讲义,似乎不太习惯这样的学习方式。因此配备适用性高的教材尤为必要。

6 课程展望

当前在国家倡导中药现代化的新形势下,各院校专业课程和学时均在变化,课程科目设置增多,而课程学时相对减少,因此,为了中药鉴定工作的继承和发展及提高中药鉴定学的教学质量,我们应重新认真思考目前中药鉴定学的含义和主要任务,同时探讨其教学内容和教学手段的更新等问题。现代中药鉴定学科发展的目标应是:建立包括基因组成特征、基因差异表达、化学组成和含量、植物形态、临床疗效等多层面的中药鉴定学科体系,同时通过这种学科体系建设,为寻找和扩大新药源提供可靠的指导资料[5]。除以上所述主要方法外,电化学分析、原子吸收光谱、等离子体光谱、X 射线荧光光谱、同功酶分析和 mRNA 差异显示等方法也可用于中药鉴定[6]。这些新技术的运用将逐步引导中药鉴定向标准化、高速化、信息化发展。

由此可见,《中药鉴定新技术》课程的建设中应在重视传统技术的继承的基础上,重点介绍如何运用现代生物学及化学的理论和技术方法,解决中药的真实性、中药的有效性、中药的安全性、中药的质量和质量变化规律、以及中药新资源寻找发现及中药材规范化生产等可持续发展的理论和实践问题,并通过实验培养学生的探究素质以及应用理论知识的能力,使之成为适应社会需要的专业人才。

[参考文献]

[1] 康廷国. 中药鉴定学[M]. 2版. 北京:中国中医药出版社,2007:1.

[2] 杜晔. 诠释中药鉴定四大鉴定方法[J]. 中国医药科学,2012,2(5):91,102.

[3] 籍承厚. 中药鉴定方法的新进展[J]. 中国医药导报,2007,4(21):16-18.

[4] 黄璐琦,胡之璧. 中药鉴定新技术新方法及其应用[M]. 北京:人民卫生出版社,2010:1.

[5] 郭艳丽,鞠爱霞. DNA分子标记技术在中药鉴定学中的应用[J]. 黑龙江医药,2012,25(4):545-547.

中药鉴定技术论文范文第2篇

中药鉴定学是鉴定和研究中药的品种和质量,制定中药标准,寻找和扩大新药源的应用学科。它是中药专业必修的一门专业课,具论文联盟有很强的实用性。由于受高等教育课程模式的影响,医药类高职高专《中药鉴定技术》的教学过程中多偏重于理论教学,实验课时偏少,实验内容基本以显微鉴定实验为主。

中药调剂员和中药购销员是中药学相关专业学生日后就业比较常见的岗位。两个岗位的职业能力要求中包括:常见的400种中药饮片的识别;能运用常见分析仪器对中药进行初步分析检验。

由此可见,现行的教学模式与企业对就业人员的岗位要求是不相符合的。因此,以提高学生的就业适应性为目标,对《中药鉴定技术》的教学模式进行探讨,具有十分重要的意义。

1 《中药鉴定技术》的教学现状

1.1 理论课上缺少互动性

目前,大部分医药院校在上《中药鉴定技术》课时,都是理论和实验分开教学,理论课在先,实验课在后。在理论课上,老师用语言描述或用图片来介绍药材的性状鉴别特点,学生则是不停的做笔记,而不是通过口尝,手摸,鼻嗅来学习药材的鉴别要点,这种“注入式”、缺少互动性的教学模式是存在一些弊端。因为中药鉴定技术是一门形态学科,需要反复观察,不断实践,加深印象,增强记忆,积累经验,才能真正掌握好中药鉴定的知识与技能[1]。中药鉴定技术的内容繁杂,琐碎,记忆点多,同一药材存在一药多源,同物异名,同名异物的情况;同一药材有不同的规格、等级;由于历史和经济的原因,同一药材还存在多种混淆品。因此,如果仅仅用图片来介绍,而没有药材来观摩的话,就很难达到预期的教学效果。

1.2 实验课的教学内容单一,不适应岗位需求

实验课的传统内容是以显微鉴定为主。其中,显微鉴定以“验证性”实验为主,课前老师准备实验材料,课上讲授实验方案和实验内容,然后学生按照要求去寻找药材的粉末特征组织,最后画药材的显微特征图。这种单调,“验证性”的实验教学导致学生的学习兴趣淡漠,积极性不高。

根据中药学专业学生今后就业的岗位要求可知,性状鉴别是中药鉴定工作者必备的基本功之一,理化鉴别也广泛应用于中药鉴定的实际工作中,但是性状鉴别和理化鉴别在实验课中开展的非常少,就使学生的专业知识结构与实际的工作岗位要求之间,出现知识层次的断档。

1.3 实验材料选用不全面,缺乏完整药材

性状鉴别是中药鉴定学最常用的方法之一,是鉴定任何药材的关键步骤,学生只有多看、多比较、多学习,才能更好地具备药材的性状鉴别能力。因此,实验课中所选用的材料就非常重要,应选用不同产地,不同品种的完整药材、不同规格的饮片以及相对应的常见混淆品作为材料。然而,大部分实验室由于经费,人力,物力等多方面的因素,只选用单一的饮片作为实验材料,导致很多学生只认识饮片而不认识原药材,在学习过程中把原药材和饮片割裂开。最终导致学生毕业后面对市场上不同规格,不同等级的药材时常常不知所措,不能最大程度的发挥专业优势。

2 《中药鉴定技术》的教学改革探讨

2.1 重在实践,实行理实一体化教学

中药鉴定技术是一门实践性很强的应用学科,学习这门课的最终目的是要学生具备药材的性状鉴别能

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力,并且还能用常规的分析仪器来鉴别药材的真伪、优劣。我校从下学期开始将选用一个班级,30名学生试行理实一体化教学,该教学方法是将《中药鉴定技术》的理论教学和实验教学融于一体,教学场所直接安排在中药鉴定实验室。在实践中教理论,能很好地解决理论教学与实验教学脱节问题。

在课间,以4人为一组,将课堂上要讲的药材分组发给学生,课堂上老师边教药材的性状鉴别,学生边根据老师所讲的鉴别要点,通过眼观、手摸、鼻嗅、口尝等传统方法,对药材进行观摩。在学习过程中如有任何疑问,随时都可以提问,老师教完后,学生也学会了怎样鉴别药材,所学的理论知识得到印证。下课后,以宿舍为单位,学生可以保留一份药材,从而在课后还能继续学习。下堂课开始前5分钟,以宿舍为单位,让学生根据手中的药材,讲述来源,性状鉴别特点,以巩固学习效果。

2.2 重在能力,充分利用中药标本馆资源

我校中药标本馆藏标本共500余种药材,其中冬虫夏草,鹿茸,燕窝等贵重药材约50种。在《中药鉴定技术》的教学过程中,安排(6~8课时)参观中药标本馆进行学习,尤其是要学习贵重药材。由于实验材料是消耗品,大多数院校从降低实验成本考虑,大部分贵重药材就不会作为学生实验材料。但在实际工作中,很多不法商人为牟取暴利,常用伪品或混淆品来代替正品贵重药材。通过参观标本馆,树立学生对混,伪品的警惕意识,既不会增加实验成本又可以充分利用现有资源,提高鉴别能力。

同时,随着数字化的快速发展,我校中药标本馆已将馆藏标本以文字、图像等数字化的形式存储,建立了中药学习系统,并由专任老师定期进行维护,充实。中药学习系统中的每味药都是图文并茂,记载全面,包括中药的四大鉴别方法,功能主治,用法用量,近年来的临床报道等等。学生在中药标本馆看标本的同时还可以根据自己的需求,通过馆内配备的电脑随时查阅相关信息,从而能够全面又系统的掌握。在课外,由于中药学习系统的建立,打破了地域和时间的界限,学生可随时随地通过网站进行学习,提高学习的自主性,可真正实现中药资源的全面共享。

2.3 重在拓展,深入药材市场进行现场学习

药材市场是进行药材交易的场所,市场里所含的药材品种繁多,规格齐全,可弥补实验课上教学品种的不足。此外,市场里交易的药材良莠不齐,真伪混淆,需要用专业的眼光去鉴别,因此,是学生学习的最佳场所。学校可安排两周左右的时间,让学生去当地的药材市场进行现场学习,要求学生每天至少学习8味药,掌握药材的性状鉴别要点,熟悉药材的商品规格及划分依据,熟悉常见混淆品的鉴别要点,了解市场价格,了解日成交量。每天的作业是以实验报告的形式把在市场上所学的知识,按照药材的性状鉴别要点、商品规格、市场价格以及相应混淆品的鉴别要点,分门别类的记载下来。通过零距离的接触市场,通过用专业的知识来解决实际问题,从而提高学习的积极性。

2.4 重在应用,增加理化鉴定的实验内容

理化鉴别是利用某些物理的,化学的或仪器分析方法,鉴定中药的真实性、纯度和品质优劣程度的一种鉴定方法。理化鉴别的方论文联盟法很多,要全部掌握也是有困难的。《中国药典》是国家药品标准,是从事鉴定工作的基本依据。笔者认为参照《中国药典》的标准,掌握最常用的理化鉴别方法:薄层色谱、紫外色谱及高校液相色谱,熟悉这些鉴别方法的原理及操作步骤,这对于今后从事鉴定工作会有一定的帮助。在实验课的授课过程中可根据《中国药典》的标准,进行鉴定程序的讲解与演示,从药材的取样开始,然后根据不同样品及检测要求,选择不同的方法进行鉴定,最后对药材的真实性、纯度、质量进行评价和鉴定。通过模拟情景,使学生认识到鉴定工作的严谨性,必须按照严格的程序和步骤进行。

2.5 重在创新,中药鉴定的新技术,新方法

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随着现代分子生物学技术不断发展,dna分子标记技术也逐渐应用于药材的真伪鉴别。2010版《中国药典》第一部中乌梢蛇[2]和蕲蛇[3]都新增了用pcr技术来鉴别药材的真伪。dna分子作为遗传信息的直接载体,直接分析生物的基因论文联盟型而非表现型,其鉴别结果不受观察者的主观性,药材的环境因素,样品形态(原品,粉末或片状)和材料来源的影响。因此,对于一些用传统方法难鉴别,对观察者经验要求高的药材,用分子生物学遗传标记法来鉴别,其结果更为准确可靠。

2.6 改革考核评价方式

《中药鉴定技术》课程传统的考评方式主要包括平时考核(出勤、课堂表现、作业、实验情况)占总成绩的30%,期末考试(理论考试)占总成绩的70%。这种考核方式,使学生偏重于应付理论考试,考前死记硬背性状鉴别特点,考完后不能理论联系实际。

新型的考核机制根据工作岗位对知识、能力的要求,形成两步考核法,即综合实践能力考核+基础知识考核。综合实践能力考核主要包括性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别和综合分析这四个方面的内容。基础知识考核以笔试为主,结合平时成绩。两种考核分别以100分记入学生的学习成绩。在综合实践能力考核中,如考核学生的性状鉴别能力,可从常用药材及常见伪品中随机抽取60种药材作为考试内容,让学生在1h内完成辨认。如考察学生的显微鉴别能力,分别以3~4种混合成一包未知混合粉末,分发给学生,让其通过显微鉴定,鉴定出分别为何种药材,并绘出每味药材的主要粉末特征图或以文字描述其主要鉴别特征。如考核学生的综合分析能力,可通过模拟实际工作情景,选取相关的药材,让学生根据2010版《中国药典》(一部)的检测程序来鉴别这个药材的真伪,优劣。通过以上全方位,多层次的考核,不仅对学生的评价更为客观,同时,通过此类考核机制使教学更贴近企业和社会的需求。

中药鉴定技术论文范文第3篇

【关键词】工作过程 项目化 课程设计

【中图分类号】G 【文献标识码】A

【文章编号】0450-9889(2015)09C-0083-03

一、基于工作过程的课程设计方法

所谓的工作过程是指在企业里为完成一件工作或任务并最终以获得工作成果为目的而设计进行的一个完整的工作程序。工作程序包括完成工作时需要的方式、内容、方法、组织以及工具等。每一个完整的工作程序都将体现在职业中,每一个职业含有一件又一件的工作过程。20世纪90年代由德国布莱梅大学技术与职业教育研究所将职业教育与社会职业相联系,基于职业中的工作过程提出了课程设计方法,也称为典型工作任务分析法,该方法是通过整体化分析和描述现代职业工作进行的工作过程系统化的课程设计方法。

人们在学习获取知识的过程中,为了高效获取知识,利用想象、手工、口述、图形等多种手段,汇集形成一种情境,我们称之为学习情境,通常伴随时代的发展这种情境会有不同程度的创新。工作过程课程设计方法首要的任务就是设计学习情境,学习情境是组成基于工作过程的课程方案设计的关键要素。职业教育的学习内容是为完成职业工作过程服务的,职业教育学习情境实际是在模拟职业工作情境,将职业教育的学习内容安排到学习情境中来提高学生的各项社会职业能力。学习情境的开发设计,换言之就是传统意义上适合职业教育实际情况的校本课程开发,这个过程要求将传统的按章节设计的课程内容转换成若干个学习情境,要完成这个转换对学校和教师的要求都很高。

二、中药鉴定与养护技术的特点

中药鉴定与养护技术是中草药栽培技术专业(含加工与营销方向)、中药制剂技术专业的主干课程,是针对中药材生产、中药材鉴别、中药材养护、中药材购销等职业岗位设置的一门职业能力核心课,是一门重要的专业技能训练课程。它是本校结合本专业实际情况,将中药鉴定技术与中药养护技术两门课程进行有机结合形成的新课程。中药鉴定、中药养护是药品工作技术人员应有的专业技能。主要讲授中药性状鉴定的基本操作技能、显微鉴定的基本操作技能、显微特征描述方法、理化鉴定的基本操作技能及中药材商品基本养护技术。介绍常用中药的来源、主产地、采制、性状鉴别、显微鉴别、成分、理化鉴别,包括根类、根茎类、茎木及树脂类、皮类、叶类、全草类、花类、果实种子类、藻菌及地衣类、动物类、矿物类,并介绍了中药粉末的显微鉴定、中成药的显微鉴定、未知粉末药材的鉴定的知识。讲授中药商品变异现象、中药商品变异因素以及一般商品养护与易变异商品养护方法。本课程以中药的四大鉴定方法及养护技术为手段,阐明各个中药具体品种的名称、来源、产地、采收加工、性状、显微、成分、理化、功效、商品形态及养护等内容,指导学生对中药的识别、鉴定和养护,并通过实验训练,着重培养学生运用四大鉴定法在具体品种上进行真伪鉴别和针对中药材进行养护的实践能力。学生在学习了应用化学、实用中药学基础等相关课程的基础上,进一步学习本课程。

掌握本课程内容,将为进一步学习中药炮制技术、实用方剂与中成药及其它后续课程,以及为今后从事中药的生产、质量检测、经营管理等相关工作打下良好的基础。更主要的,中药行业各岗位在国家职业标准中均有对中药鉴别能力的要求,中药鉴别与养护技术是中药行业岗位群的行业通用技能。中药鉴定技术、中药养护技术又是中药验收员、中药购销员等岗位的职业特定技能。掌握中药鉴定的基本技能和基本方法,真正做到鉴别中药的真伪和优劣,并为学生通过医药商品购销员技能证书的考核起到良好的支撑作用。中药养护技术为学生将来走上工作岗位进行药材养护起到重要的作用。它的培养目标直接关系到毕业生的专业素质,必须结合中药鉴定、中药养护的特点及社会的专业需求进行综合分析与研究。根据专业培养目标,本课程以中药鉴定为核心,辅以中药养护的知识及技能,要求掌握中药鉴定的基本理论、基本方法和基本技能及相应的养护技能。中药鉴定有四大鉴定方法,即基源鉴定、性状鉴定、理化鉴定、显微鉴定。从传统的眼观、手摸、鼻闻、口尝、水试、火试等简便方法鉴定药材的外观性状特点,外观性状包括大小、形状、表面、断面、质地、气、味、水试和火试等十个方面的内容;到现代的结合物理、化学、生物学、计算机技术、使用仪器进行研究分析的先进高端鉴定方法。如:紫外光谱、红外光谱、薄层色谱、气相色谱、荧光光谱、高效液相色谱、核磁共振、扫描电子显微镜、计算机图相分析、各种电泳同功酶分析法、分子生物学技术、x射线衍射技术、高效毛细管电泳、各种热分析技术、聚类分析法、人工神经网络等检测手段均被吸收到中药鉴定的方法中,大大丰富了中药鉴定的内容。

三、基于工作过程的项目化课程设计过程

(一)课程项目化设计的思路

基于工作过程的课程项目化设计方法分为三步:第一步,在现今社会职业形势基础上分析工作任务,按照能力发展和职业成长规律确定职业典型的工作任务。第二步,设计学习情境,即构建“小型的主题学习单元”,要将学习领域中的能力目标和学习内容进行教学论和方法论的转换。在进行学习情境设计前要确定本课程能力培养目标,在设计的各个教学情境单元中要体现专业能力、社会能力、方法能力三个职业能力的培养,以职业能力培养为目标,设计教学情境,设计的教学情境要为学生提供一个完整、真实的问题情境,这个问题情境是由企业实际工作岗位上具体工作任务转化而来,在教学情境中,一般以具体的任务形式来体现。第三步,编制课程标准,制定教学大纲。

按照以上三步,我们课题组对广西中医药大学制药厂、广西药用植物园种子种苗公司、南宁市华泰饮片制药厂、德洲医药公司、桂和堂等几家中药种植、药品生产、经营企业进行调查,组织企业专家对中草药栽培技术专业(含加工与营销方向)、中药制剂技术专业岗位群进行了工作任务分析,确定职业典型工作任务,针对不同岗位的工作任务提出了知识能力、技能能力和素质能力的要求。根据工作任务的相关性,整合形成中药种植、中药饮片加工与生产、药品检验和药品经营与使用四个职业行动领域。行业企业专家提出职业工作过程中的职业能力,专家结合职业能力对学科体系中的教学内容解构,再结合学院实际,根据学生的认知特点和职业成长规律,重新序化并构建了以工作过程为导向的学习领域课程体系。该体系分为三个部分,第一部分为职业能力基础课(必修课,占总学分25.52%);第二部分为职业能力核心课(必修课,占总学分44.83%);第三部分为职业能力拓展课一(系级选修课,应修满12学分,占总学分8.28 %)、拓展课二(院级选修课,应修满8学分,占总学分5.52%)。以中草药栽培技术专业为例,职业能力基础课设置了应用化学、植物生产环境等课程。职业能力核心课设置了药用植物栽培技术、药用植物病虫害防治技术、实用中药学基础、中药鉴定与养护技术、中药炮制技术、医药市场营销技术等六个专业方向学习领域,每个学习领域都是一个完整的工作过程,课程排序遵循学生认知规律和职业成长规律。

(二)课程目标设计

课程总体目标:学习完成本课程设计的项目任务后,学生会运用传统鉴别经验和现代鉴定方法鉴定常用中药,为今后从事中药的真伪鉴别、质量评价、相关中药研发实验操作、中药材基本养护等工作打下基础。能运用中药鉴定、养护的技能操作及相关理论知识熟练完成中药鉴定、养护岗位所承担的具体工作任务,同时培养严谨细致的工作态度,实事求是、认真负责的职业道德和工作作风,树立全面控制药物质量的观念。使学生成为能适应社会发展的实用型人才。课程目标设计包括以下三个方面。

1.知识目标。理解中药鉴定及养护操作必备的基本知识;理解350种常用中药的性状鉴别要点;认知与中药鉴定有关的法律法规;掌握中药鉴定的目的、依据和方法;掌握中药养护的基本理论与方法;掌握中药的来源、主要性状、显微和理化特征;熟悉中药的采收、加工、贮藏对中药质量的影响;掌握各种不同中药材养护技术;了解中药鉴定的意义和任务、常用中药的主产地和中药鉴定的一般程序;了解市场假劣药材动态及中药鉴定技术的发展动态;了解中药理化鉴定的基本方法和20种药材的理化鉴定要点。

2.职业能力目标。能用性状鉴定技术快速准确地鉴定350种常用中药材及饮片的真伪优劣;能用显微鉴定技术准确鉴定20种常用中药材的真伪优劣;熟练中药的来源、性状、显微、理化鉴定综合操作技能;学会借助相关书籍解决中药鉴定的实际问题;会独立查阅相关文献获取新知识;会针对不同的中药材设计具体的养护方案。

3.职业素质目标。树立全面控制药物质量的观念,树立全心全意为患者服务的思想,表现出关心、爱护、尊重患者和认真、严谨、热情、勤快的工作作风,严谨细致的工作态度,实事求是、认真负责的职业道德,为从事药学工作打下必备的基础。

(三)课程教学内容设计

围绕职业工作过程中实际工作任务来展开,课程内容进行工作过程项目化教学设计。中药鉴定与养护技术课程根据中药鉴定行业发展和领域,职业岗位群需求,遵循学生职业成长规律,以中药的四大鉴定方法为手段,围绕四大鉴定技术开展各类型中药鉴定及配套相关养护技术,教学内容为专业教学服务。设计“中药鉴定与养护基础知识”“中药分类鉴定技术”“中药分类养护技术”共3个学习情境、15个项目任务,将传统学科体系进行解构,对工作过程系统化知识进行重构,每个学习项目以完成工作任务为目的,指引学生自觉组织相关知识及技能来完成任务。课程教学内容设计具体如表1所示。

(四)课程教学实施及教学方法

学习项目的实施主要按照“资讯、决策、计划、实施、检查、评价”六步法进行。在整个教学过程,学生是主体,教师起主导作用。根据不同类型项目任务类型,灵活多样地采用“任务驱动、工作引导、项目导向、工学交替”四阶段教学模式,利用校内外实训学生开展实践教学活动。根据完成不同学习项目内容,教师灵活选择四阶段教学法、项目教学法、头脑风暴法等各种教学方法,强化学生实践能力培养,突显职业教育“以能力为中心”的特点。表2以项目3植物类根及根茎类中药鉴定技术为例,说明了教学实施过程和教学方法的使用。

表2 项目3植物类根及根茎类中药鉴定技术

课程 中药鉴定与养护技术

学习情境 中药分类鉴定技术

项目名称 植物类根及根茎类中药鉴定技术 建议课时 2(80分钟)

知识目标 1.掌握黄芪、甘草、党参的鉴别;

2.掌握党参与明党参、柴胡与银柴胡、白芍与赤芍的对比鉴定;

3.熟悉根及根茎类药材的一般鉴别方法;

4.了解苦参、银柴胡的性状鉴别。

能力素质 会运用中药的基源、性状、显微、理化鉴定综合操作技能;

会借助相关书籍及互联网解决中药鉴定中出现的新的实际问题;

会独立查阅相关文献获取新知识。

教学重点 重点掌握黄芪、甘草、党参的来源、性状、显微、理化鉴别。

教学难点 甘草和党参的来源,药材鉴别。

教学过程

1、教学准备2分钟;2、复习引入新课3分钟;3、设计情境,提出任务,5分钟(资讯);4、小组学习讨论并制定任务的实施方案,计划20分钟(决策、计划);5、方案的实施,计划30分钟(实施);6、项目完成效果评价,计划8分钟(检查、评估);7、拓展知识的学习,计划10分钟;8、课后作业安排,计划2分钟。

教学方法 1、任务驱动;

2、项目教学法;

3、头脑风暴法 【教学评价与分析】 评价内容:知识能力,制定方案能力,方案实施能力(含小组团队合作能力、工作态度、沟通能力、问题解决能力、信息处理能力)、任务完成情况评价方式:教师评价

实践教学的设计思想:实践教学针对相关的专业工种,实施“职业活动导向教学模式”,采用“做、论、讲、评”四环节教学法。做,即实际操作,包括校内实训、现场实训(在企业进行)。体现并要努力实现高职教育特色,理论以“必需、够用”为度,技术要实用、过硬,以为学生一毕业就能够熟练胜任有关工作岗位而进行设计。

(五)课程评价及考核方式

基于工作过程的项目化教学评价模式融入了诊断性评价、形成性评价和总结性评价,采用“全方位、多角度、综合性”的考核评价模式。注重对过程的控制,以满足职业岗位需要为目的,具有“过程性、多元化、双向性和可持续性的特点”。具体评价及考核方式如表3。

项目3 植物类根及根茎类中药鉴定技术

项目4 植物类茎木类中药鉴定技术

项目5 植物类皮类中药鉴定技术

项目6 植物类叶类中药鉴定技术

项目7 植物类花类中药鉴定技术

项目8 植物类果实种子类中药鉴定技术

项目9 植物类全草类中药鉴定技术

项目10 树脂类中药鉴定技术

项目11 菌、藻、地衣类中药鉴定技术

项目12 动物类中药鉴定技术

项目13 矿物类中药鉴定技术

项目14 中成药鉴定技术

项目15 中药分类养护技术 1.学习态度

2.学习纪律

3.操作技能考核

1.学习态度30%

2.学习纪律20%

3.养护报告20%

4.操作技能考核30%

综合

评价

将各评价单元的分数按照比重累计相加后,按照评价标准分为优、良、中、及格和不及格五级(90分以上为优,80-89分为良,70-79分为中,60-69分为及格,60分以下为不及格)

四、教学实践效果

在讲授完中药鉴定与养护技术课程之后,进行期末考核,最终进行综合评价。约有90%以上学生可以顺利通过闭卷考试,几乎所有的学生能顺利通过操作技能考核,最终取得本门课程的学分,成绩比传统模式授课提高了十几个百分点,特别是操作技能考核,比传统模式授课学生能鉴别出的药材增加近百种。此外,我们还组织了学生参加每年的中药理论知识比赛和每两年举行一次的全国中药传统技能大赛,均取得了不错的成绩。

项目化教学以学生为主体,在现实企业工作情境指导下,把教育目的、过程和结果与学生的学习和发展相互联系起来,充分让学生体会到了岗位工作的特点。提高了学生学习的积极性,同时更锻炼了老师的课程开发能力和课程职业整合设计能力。

【参考文献】

[1]胡凤菊,刘纪新,董丽周,腾军. 基于工作过程的《AutoCAD》项目化课程设计[J] .职业技术研究,2013(3)

中药鉴定技术论文范文第4篇

中药鉴定学是鉴定和研究中药的品种和质量,制定中药标准,寻找和扩大新药源的应用学科。它是中药专业必修的一门专业课,具有很强的实用性。由于受高等教育课程模式的影响,医药类高职高专《中药鉴定技术》的教学过程中多偏重于理论教学,实验课时偏少,实验内容基本以显微鉴定实验为主。

中药调剂员和中药购销员是中药学相关专业学生日后就业比较常见的岗位。两个岗位的职业能力要求中包括:常见的400种中药饮片的识别;能运用常见分析仪器对中药进行初步分析检验。

由此可见,现行的教学模式与企业对就业人员的岗位要求是不相符合的。因此,以提高学生的就业适应性为目标,对《中药鉴定技术》的教学模式进行探讨,具有十分重要的意义。

1 《中药鉴定技术》的教学现状

1.1 理论课上缺少互动性

目前,大部分医药院校在上《中药鉴定技术》课时,都是理论和实验分开教学,理论课在先,实验课在后。在理论课上,老师用语言描述或用图片来介绍药材的性状鉴别特点,学生则是不停的做笔记,而不是通过口尝,手摸,鼻嗅来学习药材的鉴别要点,这种“注入式”、缺少互动性的教学模式是存在一些弊端。因为中药鉴定技术是一门形态学科,需要反复观察,不断实践,加深印象,增强记忆,积累经验,才能真正掌握好中药鉴定的知识与技能[1]。中药鉴定技术的内容繁杂,琐碎,记忆点多,同一药材存在一药多源,同物异名,同名异物的情况;同一药材有不同的规格、等级;由于历史和经济的原因,同一药材还存在多种混淆品。因此,如果仅仅用图片来介绍,而没有药材来观摩的话,就很难达到预期的教学效果。

1.2 实验课的教学内容单一,不适应岗位需求

实验课的传统内容是以显微鉴定为主。其中,显微鉴定以“验证性”实验为主,课前老师准备实验材料,课上讲授实验方案和实验内容,然后学生按照要求去寻找药材的粉末特征组织,最后画药材的显微特征图。这种单调,“验证性”的实验教学导致学生的学习兴趣淡漠,积极性不高。

根据中药学专业学生今后就业的岗位要求可知,性状鉴别是中药鉴定工作者必备的基本功之一,理化鉴别也广泛应用于中药鉴定的实际工作中,但是性状鉴别和理化鉴别在实验课中开展的非常少,就使学生的专业知识结构与实际的工作岗位要求之间,出现知识层次的断档。

1.3 实验材料选用不全面,缺乏完整药材

性状鉴别是中药鉴定学最常用的方法之一,是鉴定任何药材的关键步骤,学生只有多看、多比较、多学习,才能更好地具备药材的性状鉴别能力。因此,实验课中所选用的材料就非常重要,应选用不同产地,不同品种的完整药材、不同规格的饮片以及相对应的常见混淆品作为材料。然而,大部分实验室由于经费,人力,物力等多方面的因素,只选用单一的饮片作为实验材料,导致很多学生只认识饮片而不认识原药材,在学习过程中把原药材和饮片割裂开。最终导致学生毕业后面对市场上不同规格,不同等级的药材时常常不知所措,不能最大程度的发挥专业优势。

2 《中药鉴定技术》的教学改革探讨

2.1 重在实践,实行理实一体化教学

中药鉴定技术是一门实践性很强的应用学科,学习这门课的最终目的是要学生具备药材的性状鉴别能

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力,并且还能用常规的分析仪器来鉴别药材的真伪、优劣。我校从下学期开始将选用一个班级,30名学生试行理实一体化教学,该教学方法是将《中药鉴定技术》的理论教学和实验教学融于一体,教学场所直接安排在中药鉴定实验室。在实践中教理论,能很好地解决理论教学与实验教学脱节问题。

在课间,以4人为一组,将课堂上要讲的药材分组发给学生,课堂上老师边教药材的性状鉴别,学生边根据老师所讲的鉴别要点,通过眼观、手摸、鼻嗅、口尝等传统方法,对药材进行观摩。在学习过程中如有任何疑问,随时都可以提问,老师教完后,学生也学会了怎样鉴别药材,所学的理论知识得到印证。下课后,以宿舍为单位,学生可以保留一份药材,从而在课后还能继续学习。下堂课开始前5分钟,以宿舍为单位,让学生根据手中的药材,讲述来源,性状鉴别特点,以巩固学习效果。

2.2 重在能力,充分利用中药标本馆资源

我校中药标本馆藏标本共500余种药材,其中冬虫夏草,鹿茸,燕窝等贵重药材约50种。在《中药鉴定技术》的教学过程中,安排(6~8课时)参观中药标本馆进行学习,尤其是要学习贵重药材。由于实验材料是消耗品,大多数院校从降低实验成本考虑,大部分贵重药材就不会作为学生实验材料。但在实际工作中,很多不法商人为牟取暴利,常用伪品或混淆品来代替正品贵重药材。通过参观标本馆,树立学生对混,伪品的警惕意识,既不会增加实验成本又可以充分利用现有资源,提高鉴别能力。

同时,随着数字化的快速发展,我校中药标本馆已将馆藏标本以文字、图像等数字化的形式存储,建立了中药学习系统,并由专任老师定期进行维护,充实。中药学习系统中的每味药都是图文并茂,记载全面,包括中药的四大鉴别方法,功能主治,用法用量,近年来的临床报道等等。学生在中药标本馆看标本的同时还可以根据自己的需求,通过馆内配备的电脑随时查阅相关信息,从而能够全面又系统的掌握。在课外,由于中药学习系统的建立,打破了地域和时间的界限,学生可随时随地通过网站进行学习,提高学习的自主性,可真正实现中药资源的全面共享。

2.3 重在拓展,深入药材市场进行现场学习

药材市场是进行药材交易的场所,市场里所含的药材品种繁多,规格齐全,可弥补实验课上教学品种的不足。此外,市场里交易的药材良莠不齐,真伪混淆,需要用专业的眼光去鉴别,因此,是学生学习的最佳场所。学校可安排两周左右的时间,让学生去当地的药材市场进行现场学习,要求学生每天至少学习8味药,掌握药材的性状鉴别要点,熟悉药材的商品规格及划分依据,熟悉常见混淆品的鉴别要点,了解市场价格,了解日成交量。每天的作业是以实验报告的形式把在市场上所学的知识,按照药材的性状鉴别要点、商品规格、市场价格以及相应混淆品的鉴别要点,分门别类的记载下来。通过零距离的接触市场,通过用专业的知识来解决实际问题,从而提高学习的积极性。

2.4 重在应用,增加理化鉴定的实验内容

理化鉴别是利用某些物理的,化学的或仪器分析方法,鉴定中药的真实性、纯度和品质优劣程度的一种鉴定方法。理化鉴别的方法很多,要全部掌握也是有困难的。《中国药典》是国家药品标准,是从事鉴定工作的基本依据。笔者认为参照《中国药典》的标准,掌握最常用的理化鉴别方法:薄层色谱、紫外色谱及高校液相色谱,熟悉这些鉴别方法的原理及操作步骤,这对于今后从事鉴定工作会有一定的帮助。在实验课的授课过程中可根据《中国药典》的标准,进行鉴定程序的讲解与演示,从药材的取样开始,然后根据不同样品及检测要求,选择不同的方法进行鉴定,最后对药材的真实性、纯度、质量进行评价和鉴定。通过模拟情景,使学生认识到鉴定工作的严谨性,必须按照严格的程序和步骤进行。

2.5 重在创新,中药鉴定的新技术,新方法

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随着现代分子生物学技术不断发展,dna分子标记技术也逐渐应用于药材的真伪鉴别。2010版《中国药典》第一部中乌梢蛇[2]和蕲蛇[3]都新增了用pcr技术来鉴别药材的真伪。dna分子作为遗传信息的直接载体,直接分析生物的基因型而非表现型,其鉴别结果不受观察者的主观性,药材的环境因素,样品形态(原品,粉末或片状)和材料来源的影响。因此,对于一些用传统方法难鉴别,对观察者经验要求高的药材,用分子生物学遗传标记法来鉴别,其结果更为准确可靠。

2.6 改革考核评价方式

《中药鉴定技术》课程传统的考评方式主要包括平时考核(出勤、课堂表现、作业、实验情况)占总成绩的30%,期末考试(理论考试)占总成绩的70%。这种考核方式,使学生偏重于应付理论考试,考前死记硬背性状鉴别特点,考完后不能理论联系实际。

新型的考核机制根据工作岗位对知识、能力的要求,形成两步考核法,即综合实践能力考核+基础知识考核。综合实践能力考核主要包括性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别和综合分析这四个方面的内容。基础知识考核以笔试为主,结合平时成绩。两种考核分别以100分记入学生的学习成绩。在综合实践能力考核中,如考核学生的性状鉴别能力,可从常用药材及常见伪品中随机抽取60种药材作为考试内容,让学生在1h内完成辨认。如考察学生的显微鉴别能力,分别以3~4种混合成一包未知混合粉末,分发给学生,让其通过显微鉴定,鉴定出分别为何种药材,并绘出每味药材的主要粉末特征图或以文字描述其主要鉴别特征。如考核学生的综合分析能力,可通过模拟实际工作情景,选取相关的药材,让学生根据2010版《中国药典》(一部)的检测程序来鉴别这个药材的真伪,优劣。通过以上全方位,多层次的考核,不仅对学生的评价更为客观,同时,通过此类考核机制使教学更贴近企业和社会的需求。

中药鉴定技术论文范文第5篇

[关键词] 中药鉴定;发展史;方法学;研究方向

中药鉴定学是研究和鉴定中药的品种和质量,制定中药质量标准,寻找和扩大新药源的应用学科[1-2]。其研究对象是中药,包括中药材、饮片和中成药。在中药现代化的进程中,中药的真伪优劣鉴定具有非常重要的作用,因此中药鉴定学的发展是其他中医药学科发展的基础和保障,是中药领域的基础学科,已成为广大中药学专业学生的一门必修课[3]。

1中药鉴定学科及其方法学的产生

中药鉴定学是在古代本草学和现代生药学的基础上形成并发展起来的。20世纪30年代,国外生药学传入我国,1934年赵橘黄与徐伯鋆合编了《现代本草学——生药学》上册,1937年叶三多编写了《生药学》下册,这是两本把近代生药学理论和方法介绍到本草学和中药学研究的专著和教材[4-6]。

1949年以后,我国生药学进入迅速发展时期。楼之岑教授和徐国钧教授是我国现代生药学的主要奠基者,他们对现代生药学方法进行了系统的介绍,把四大鉴定方法引入了中药鉴定,并应用于大量中药鉴定研究实践,对中药鉴定学科的建设做出了开拓性贡献。20世纪50年代以后,出版了一系列以中药鉴定为主要内容的学术著作,如《中国药典》(1953年版、1963年版第1部)、李承祜(1952年)、楼之岑(1955年、1964年)、徐国钧(1957年)等多版生药学教材,19551965年裴鉴、周太炎编著了《中国药用植物志》共8册,中国医学科学院药物研究所等编著了《中药志》(19591961年),谢宗万编著了《中药材品种论述》(1964年),以及《药材学》(1960)、《中药鉴别手册》(1959)、《中药材手册》、《药材资料汇编》、《中药鉴定参考资料》、《中草药学》、《中药大辞典》等一系列著作。这些著作和工作,从不同侧面对中药的四大鉴别(基原鉴别、性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别)作了详细的论述,为中药鉴定学的确立打下了坚实的基础[1-6]。这些著作的出版标志着我国中药鉴定研究发展的第一个高潮[2-6]。

1956年我国组建了北京、上海、广州、成都等4所中医学院,以后相继建立20多所中医院校,中医药教育从此不断扩大和提高。1959年,各学校相继成立了中药系,开设中药专业,1964年开设了《中药材鉴定学》课程,并被确立为专业课之一[2,7]。1977年,成都中医学院主编了我国第一本高等院校《中药鉴定学》教材,明确了中药鉴定学“是研究和鉴定中药的品种和质量,寻找和扩大新药源的学科”,确定了四大鉴别方法,其主要内容记叙方式为以后的版本所采用,为中药鉴定学教材的更新打下了基础,是中药鉴定学史上的一个重要里程碑,标志中药鉴定学科的形成。此后,随着中药鉴定研究的发展、中药标准化的进程和《中国药典》的不断改进,《中药鉴定学》教材也不断发行各种新版本对内容进行充实和更新,如成都中医药大学的第2版(1979年)、任仁安的第3版(1986年)、李家实的第4版(1996年)和康廷国的第5版教材(2003年,2007年),以及张贵君(2002年)、石俊英(2006年)和王喜军(2012年)等各种版本的《中药鉴定学》教材,这些各具特色和多样性的教材极大繁荣和丰富了中药鉴定学的学科建设内容,促进了其发展。2002年张贵君主编的版本中明确提出了制定中药质量标准是中药鉴定学的任务之一[2],自此,中药鉴定学就包括继承祖国药学遗产、整理中药品种,制定中药标准,鉴定中药的品种和质量,寻找和扩大新药源这四大任务。

在中药鉴定学的发展过程中,植物系统分类学、植物化学、生物化学、分子生物学、细胞生物学及现代仪器分析等多学科的知识和技术,相互融合应用于中药的品质和资源研究[3],衍生和发展了一些新的学科,如中药资源学、中药分子鉴定学、中药(材)商品学、中成药分析、药用植物学、药用动物学、药用矿物学等,形成了中药鉴定学蓬勃发展的学科群。其中中药资源学不仅涉及到中药资源品种的鉴定、生态、分布、保护、生产和开发利用,还涉及到资源活性成分的生物转化和生物工程等工程学科,因此,中药鉴定学与中药资源学存在很多交叉内容。21世纪初开始,现代生物技术,现代仪器分析技术和计算机技术大量应用于中药鉴定研究,生物鉴定方法不断发展和完善,标志中药鉴定学已经进入了生命科学和信息科学时代,开启了中药鉴定学新的发展阶段。

2中药鉴定方法学的发展进程

2.1来源鉴定和品种整理

用系统分类学方法确定中药的原植物或原动物的来源物种是一切中药鉴定方法的基础。古代本草和文献中所载的药物来源是当代用药的依据之一。对古今中药品种进行考证并探讨其历史演变,实地对药材原植物进行分类鉴定、结合现代临床应用和药理药化研究进行品种整理是中药鉴定研究的一个基本方法。

六五(1981—1985年)期间,“中药材同名异物的系统研究”对贝母类、金银花、大黄、柴胡、细辛、石斛等类中药材的同名异物混乱品种进行了系统研究,在地理分布、生态、植物形态、生药性状、商品规格、显微鉴定、理化分析等方面比较了其异同,从而达到了正确鉴定品种,制定品质标准的目的,为逐步澄清中药材同名异物的品种,发展生产提供了依据[8]。七五(1986—1990年)和八五(1991—1995年)期间,楼之岑和徐国鈞院士牵头开展了对213类中药材进行了“品种整理与质量评价”的系统研究,这是新中国成立以来中药研究的一次系统的大总结。该项目对多来源中药进行本草考证、生药鉴定、化学成分、药理作用等10项系统研究,对澄清混乱品种,提高鉴定技术水平,保证药材质量,保障用药安全有效,修订、制定药品标准,开发利用新药源均有重要的科学意义和实用价值[7-8]。建国以来经过本草考证的中药材品种已有200多种,大部分常用中草药进行了系统整理研究。90年代以后,《新华本草纲要》1~3册(1988—1991年)、《中华本草》30卷(1999年)和4个民族卷(2002—2005年)、《新编中药志》1~4册(2002年)等大型中药学著作陆续出版,全面总结了我国当代中药研究包括中药鉴定和品种整理研究的最新成果,标志着我国中药鉴定研究达到了一个新的高度[7-8]。

在中药品种整理的基础上,中药资源的近缘种及系统分类研究也得到快速发展,如“九五”以来,北京中医药大学杨春澍等完成了“八角茴香类和地枫皮类药的系统研究”,中国科学院西北高原生物研究所何廷农等完成了“中国龙胆科植物的研究”[3]。2005年,肖培根院士依据植物的分类学、系统学、植物化学、药理学等多学科方法建立了研究亲缘关系、化学成分和疗效间的相关性的药用植物亲缘学。并用于大黄类、贝母类、芍药类、苍术类等药材亲缘关系的研究,对于正确进行系统分类,发现中药新资源具有重要意义[9]。通过品种整理和基原鉴定确定了中药材的来源物种,出版了大量专著和中药材原植物原色图谱,其中国家药典委员会组织,陈士林、林余霖等主编的2010年版《中华人民共和国药典中药材及原植物彩色图鉴》是中药材原植物鉴定重要的参考书。

分子生物学的一些最新成果和大量数据不断冲击传统的被子植物分类系统,为一些有争议类群的划分提供了新的证据。国际上的一些学者(angiosperm phylogeny group,APG组),联合起来制订了结合分子分类依据的被子植物分类系统,于1998,2003,2009年分别推出了第1,2,3版《被子植物APG分类法》。该系统吸收了当前全世界大部分著名的植物分类学家的意见,并在不断修改中[10]。APG分类系统的意义,在于依据植物界内在的分子信息系统进行系统分类。分子生物学和植物分类学的发展变化为中药的来源鉴定提供了新的思路和方法。

2.2性状鉴定

性状鉴定是用感官观查中药性状特征的方法,是中药材和中药饮片鉴别最常用的手段。自1953年始,《中国药典》收载了药材的性状标准,为中药性状鉴定提供了法定依据。20世纪50年代后,中药性状鉴定融入了中药经验鉴别的方法,将现代生物形态学、分类学理论知识与传统药材的经验鉴别相结合,把药材性状特征归纳为形状、大小、表面、颜色、质地、断面、气、味、水试、火试10个方面,确立了中药性状系统鉴定的基本方法[1-6]。自20世纪50年代以来,我国学者出版了大量重要的含有中药性状鉴定内容的著作,如《药材学》、《中药材手册》、《药材资料汇编》、《现代中药材商品通鉴》等,并详细地记载了药材的产销及商品规格等方面的知识; 还出版了大量的药材及饮片的彩色图谱,如中国药品生物制品鉴定所等编著的《中国中药材真伪鉴别图典》(1~4册),是药材性状图文鉴定的重要工具书之一,阎文玫的《实用中药饮片鉴别图谱》(2005)、郭长强等的《中药饮片炮制彩色图谱》(2011)和陈士林、林余霖主编的《中药饮片标准图鉴》(2013)是大型的饮片图谱参考书。这些高质量的彩色图谱,为中药材和饮片进行外观质量鉴定提供了直观的参考依据。

中药的性状鉴定技术结合现代数码、信息和计算技术,发展了一些新方法[11-14]:①中药形态结构计算机三维重建与实时动态显示技术,将模式识别的原理和模式分类方法引入多目标识别过程,实现了中药形态组织三维动态显示及其形态学参数测定。肖小河等以中药附子为例进行了连续切片的三维重建与动态显示,提供了中药鉴定生动和立体的三维图像和技术资料[11-12]。②中药微形态系统鉴定法,利用体视显微镜或加上数码成像技术,依据药材表面的细微特征信息实现中药材鉴别的方法。胡东维[15]等对十字花科19种植物种子依据种皮微形态特征的鉴别是一个成功的范例。周建理等[16]利用体视显微镜等结合电脑软件,研究了根据药材表面的信息特征实现中药材鉴别的方法。③中药脉序图谱鉴别法,依据不同种类植物之间在叶形、叶脉、脉序等形态等方面的信息来鉴别中药与其易混品的方法[17-18]。④仿生识别法,即结合仿生生物技术和计算机技术,对气味、味道和颜色进行智能识别的方法。嗅觉仿生(电子鼻)和味觉仿生(电子舌)[12-14]技术已经成功地应用在中药鉴别的探索中。应用现代先进的智能识别技术发展较为客观的性状鉴别方法,将是中药鉴定有意义的一项研究探索;微形态等方法能使现有的性状鉴定信息更为丰富和精细,是较为简单、实用和直观的方法,这项工作的系统化、数据化和信息化将有利于推广应用。

2.3显微鉴定

显微鉴定是用显微镜观察中药组织结构和粉末特征的方法,仍然是中药鉴定研究的重要内容。建国后中国才真正开始药材粉末的显微鉴别研究。1951年南京药学院徐国钧院士发表了101种药材粉末鉴定的检索表,开中药粉末鉴定之先河;此后,他陆续对400余种中药进行了显微鉴别研究,并将其技术运用到中成药的鉴别中。1986年,徐国钧主编的《中药材粉末显微鉴定》出版,使我国粉末生药显微鉴定达到国际先进水平,填补了我国中药粉末系统研究的空白[19]。七五和八五期间,213类中药材进行了品种整理与质量评价研究,显微鉴别是其中的重要内容之一。1977年版《中国药典》开始收载显微鉴别内容,用于中药材、中成药的鉴别,改变了“膏丹丸散、神仙难辨”的局面。此后不断增加,2010年版《中国药典》显微鉴别内容达到总共1 253项,较2005版增加了633项,所有药材、饮片和含生药粉的中成药都增加了专属性很强的显微鉴别内容[20-21]。

数码摄影技术的发展和偏光显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、扫描电子显微镜等多种光学仪器的应用,使显微鉴定技术与电子技术结合,能够对中药材、饮片和含生药粉末的中药丸、散等进行多元素、多角度的分析,为中药显微鉴定提供新的依据[11-13,22]。透射显微镜能观察到亚显微和细胞器结构,如从罂粟果的乳汁细胞里能看到充满生物碱的囊泡[14],这一应用还有待深入研究。扫描电镜由于能清楚地辨别细胞表面的精微纹饰和附属物,已被广泛地应用于花粉粒和种子表面超微特征的观察进行物种鉴别,如康廷国等利用扫描电镜对4 种洋金花的花粉粒进行观察, 发现它们的超微特征有显著区别[11,23];还被用于茎、叶表面或动物药表面特异性信息特征的分析,如张朝晖等发现海龙类药材表面微皮纹有明显的种间差异[24]。偏光和荧光显微镜能增加显微结构和显微特征的鉴别信息。赵中振等[25]对偏光镜下中药材粉末特征的特异性信息进行了深入的研究,并主要利用偏光镜通过药材的偏光特征鉴别了含34种药材的至宝三鞭丸,这对含有生药粉的中成药的鉴别有特殊意义。Liang等[26]使用荧光显微技术,利用茎的横切面形状、内皮层细胞壁荧光特征等鉴别点,区分了白花蛇舌草与其2种密切联系的同属易混品。Chu等[27]使用普通光学显微镜与荧光显微镜,通过观察表面片、横切片腺毛、非腺毛等显微特征及横切面的不同荧光特征,能区别金银花和山银花5 种忍冬属植物的花蕾。数码摄影技术使药材的显微结构和粉末显微特征图谱逐渐告别手绘图形,出版了《中华人民共和国药典中药材显微鉴别彩色图鉴》等大量彩色数码显微特征图谱的专著。

显微镜技术还结合多种技术发展了调查活性成分在不同组织间分布的组织化学定位法。如谭玲玲等[28]用香草醛-冰醋酸和高氯酸混合试剂显色,用显微镜观察发现北柴胡的柴胡皂苷主要分布在中柱鞘和次生韧皮部中。鄢丹等[29]采用红细胞凝集试验法和化学特征谱法测定板蓝根的抗病毒活性,发现断面木皮比低于1∶1的板蓝根质量较优。蔡宗苇等[30]建立了一种利用质谱仪直接分析植物组织切片化学成分的方法,为组织化学定位提供了一种无需样品化学处理的直接分析方法。

2.4理化鉴定

理化鉴定是用物理和化学方法,对中药所含有效或特征性成分进行定性、定量分析,以鉴定真伪优劣的方法。20世纪50年代,色谱、光谱技术等在中药分析的应用中得到推广,使中药理化鉴定的系统方法逐渐形成并趋于完善。

色谱技术在20世纪初产生,于60年代开始用于中药分析,经逐步完善后列入1977年版药典,且在以后各版药典的中药和成方制剂中的应用比例迅速上升,并成为中药鉴别的核心技术之一。其中薄层色谱法最早应用于中药的理化鉴定,采用对照品、对照药材或对照提取物进行对照鉴定,促使TLC成为中药定性鉴定中专属性较强和最广泛使用的色谱技术。中药薄层色谱研究的代表性著作是谢培山等编著的《中华人民共和国药典中药材薄层色谱彩色图集》(2009)等。随着色谱分离、分析技术的发展,高效液相色谱法(HPLC)为代表的色谱技术逐渐成为中药鉴定的主要技术,其他包括气相色谱法(GC)、高效毛细管电泳法(HPCE)和凝胶电泳等方法,可更精细和准确地反映中药中的化学组分和数量分布等特征,成为中药鉴定和质量控制的最有效方法之一[11]。2010年版药典含量测定从2005年版的245项增加到720项,其中稳定性和精确度较高的高效液相色谱法含量测定新增412项达到总共587项,对中药标准化起着极大的促进作用,此外新增了离子色谱法用于离子化合物的测定[20-21]。采用HPLC分离技术,能够得到标示某种中药特征的共有峰指纹图谱,从而实现对中药有效组分的质量控制。现阶段,HPLC是中药注射剂应用指纹图谱实现质量控制的主要方法。现已普遍采用HPLC,TLC,GC,HPCE等技术对植物药有效组分进行多成分质量控制研究,其中用一个标准品对多指标成分进行分析的方法,由于简便、实用、成本低,是首先推荐发展的方法。孙国祥等[31-32]利用数学原理将检测信号转化成易于判别、能揭示潜在化学成分和生物活性特征的数字化信息,建立了中药色谱指纹图谱潜信息特征判据方法和定性、定量相似度评价体系,对深化指纹图谱研究具有启示作用。

紫外、荧光、中红外、近红外、拉曼光谱及等离子体光谱(ICP)等光谱技术被大量成功应用到中药材和中药饮片的鉴定研究中[11],其中有些研究具有系统性,如孙素琴等[33]测试了 200 多种对照药材的红外光谱,姜大成等[34]对16组54种动物药材的红外光谱进行了鉴别研究;李峰等[35]用荧光光谱对16种矿物药进行了鉴别。在这些光谱方法中,现代近红外和拉曼光谱技术由于分析速度快、样品可无需处理或对样品无损,正在发展成一种中药快检和在线监测技术。X衍射技术首次于1997年运用于中药材的鉴定,相比植物和动物类药材的鉴定,在矿物类中药的鉴定效果较好,对于大量矿物类中药能准确鉴定,如张志杰等对我国雄黄药材的成分和晶型用X衍射技术进行了确定[36]。2010年版药典新增了ICP光谱法用于中药中有害金属元素的测定[20-21]。

色谱-光谱联用技术将具高效分离性能的色谱技术与能获取化学成分丰富结构信息的光谱技术相结合形成的新技术,是新技术的迅速发展和中药理化鉴定方法不断创新的结果。高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)、气相色谱-质谱(GC-MS)、红外光谱-质谱(IR-MS)、质谱-质谱(MS-MS)、气相色谱-付里叶变换红外光谱(GC-FTIR)、高效毛细管电泳-质谱(HPCE-MS)等在中药的品种鉴定与质量评价方面发挥了重大的作用。其中应用最广泛的是液质(HPLC-MS)联用技术。2010年版《中国药典》首次采用液谱-质联用技术(HPLC-MS)控制中药材千里光中的有毒成分和测定川楝子、苦楝皮中既有效又有毒的成分[20,21]。

2.5生物鉴定

生物鉴定即对生物特征的鉴定,是对中药所含化学物质的生物效应(药效、活力或毒力)测定或对生命信息物质(核酸、蛋白质、细胞结构等)的识别,以达到品质鉴定目的的一种方法[37]。常用的方法有免疫鉴定法、生物效价或生物活性测定法、DNA分子鉴定法、mRNA差异显示鉴定法、细胞生物学鉴定法等[37-39]。生物鉴定作为中药鉴定学的一种方法学始见于张贵君主编的2009年版的教材[2]。

2.5.1生物效价测定法 对活性物质不明确的中药,生物效价或活性测定是评价质量常用的方法。常用的有抗菌效价、免疫作用、抗凝血活性、异常毒性、降压物质的测定以及过敏反应检查法、溶血与凝聚检查法等[37-39]。在2010年版药典中,用抗凝血酶活性来评价水蛭药材的有效性;在地黄的鉴别中,采用薄层自显影技术,既达到薄层色谱分离的显色效果,又可同时检测供试品抗氧化的强度[20-21]。肖小河等依据中药药性理论和热力学理论,提出基于生物热动力表达的中药质量生物效价评价方法[11]。不同中药作用于微生物生长代谢的热功率谱图和热动力学参数可作为中药生物检测的定量指标。以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌等细菌为观察对象,研究了不同种质的板蓝根[40]、不同产地的黄连[41]对菌株的不同生物热力学表达影响,表明该方法可用于鉴定不同品种、不同产地、不同生长年限的药材。

2.5.2免疫鉴定法 不同动植物药材含有不同的特异蛋白,免疫鉴别即用动植物所含的特异蛋白制备的特异抗体与待检品中的特异抗原结合产生沉淀反应来鉴别药材的真伪。该技术适用于亲缘关系比较接近的动物药的鉴别。丁培贤等[42]采用免疫电泳法及琼脂免疫扩散法准确鉴定了虎、豹等多种动物的骨骼,并能将豹骨进一步鉴定为雪豹、云豹或金钱豹。这说明免疫鉴定方法是一种特异性很强的鉴别法。

2.5.3中药分子鉴定法 中药分子鉴定一般是指依据大分子(核酸和蛋白)特征的鉴定。由于中药样品的特殊性,核酸分子鉴定主要集中于DNA分子鉴定,如DNA条形码鉴定技术、基于PCR的分子鉴定技术、基于分子杂交的DNA分子技术等。20世纪90年代,随着生物技术的发展,中药鉴定学与分子生物学相融合,形成了分子生药学这一新兴交叉学科[3]。1992—2003年,有60多类型植物药、12个类型的动物药用分子生物学方法进行了鉴别研究,发表了百余篇论文。2000年,黄璐琦等编著了《分子生药学》[39](2000年第1版,2006年第2版),该书系统总结和论述了分子生药学的理论和方法。2004年邵鹏柱、曹晖等编著了《中药分子鉴定》一书,着重介绍10余种常用和基本的分子生物学方法及其在中药分子鉴定中的应用,是国内外分子鉴定研究成果的汇总和总结[43]。中药分子鉴定技术不仅用于中药不同物种的鉴别,也广泛用于种下不同居群、不同种质资源和地道药材的研究[39],已用于厚朴、芍药、苍术、白芷、栝楼、明党参、半夏等诸多药材的种内及种间关系研究,为中药鉴定提供了遗传学证据。2010年版《中国药典》首次采用了DNA分子鉴定技术用于川贝母及蛇类药材物种的鉴定[20]。2010年,陈士林等完成了常用中药材原植物DNA条形码的鉴定研究,编著了《中药DNA条形码分子鉴定》[44],通过研究比较psbA-trnH, matK, rbcL, rpoC1, ycf5, ITS2和ITS等7个候选DNA条形码,发现ITS2是最佳条形码序列。随着中药材 DNA 条形码分子鉴定方法研究的深入与普及,国家药典委员会讨论通过中药材DNA 条形码分子鉴定指导原则列入2010年版《中国药典》增补本[45]。

3中药鉴定方法学的发展趋势

早期中药鉴定方法包括来源、性状、显微和理化鉴定四大鉴别法。随着生物技术的发展和安全性评价的需要,又逐渐发展和完善了生物鉴定法。这些方法都在不断发展中,在保证临床用药安全有效方面都有着不可替代的重要作用,对推动中药鉴定学的发展有非常重要的意义。

中药的特点是品种多,其形态和组织千变万化,其化学成分或有效成分复杂。品种多,就需要系统、大规模地比较和分析其鉴别特征,才能准确地把握和鉴别它们。当代学科发展的最大特点是计算科学技术、网络技术和信息技术的渗透,使得中药的系统鉴别特征和方法能够信息化、数据化,便于传播。中药鉴定技术的信息化和系统化发展,有利于它的推广和应用。随着物理、化学、生物学和信息科学的发展,以及仪器分析的手段不断更新,紫外、红外、质谱、核磁共振、气相、高效液相、各种电泳分析法、扫描电子显微镜技术、分子生物学技术、X射线衍射技术、计算机数据和图像处理技术、智能技术等多种技术的组合被吸收运用到中药鉴定方法中,将不断用客观、科学的分析方法,完善和代替主观的分析方法,用准确、精细的分析方法代替粗略笼统的分析方法,不断丰富中药鉴定学的内容,形成以“四大鉴别法”为基础、以生物技术结合理化分析为重点、逐步适应中药现代化并有利于中药走向世界的一套更为科学、完善、先进的中药鉴定体系。各种通用化、标准化、精细化的中药鉴定技术的系统化和信息化发展成为未来中药鉴定方法学发展的方向。

系统生物基因组学、蛋白质组学和代谢组学等多种现代生物技术整体研究方法,有助于帮助人们逐步形成从局部观走向整体观,从线性思维走向复杂性思维,正确认识中药质量。因此,基于系统生物学整体研究的思路和方法建立中药品质整体综合分析模式和生物鉴定方法,将是中药品质评价发展的一项重要研究内容。

中医药历史源远流长。在当前我国大力加强中药研究和加速中药现代化的进程中,中药的准确鉴别仍然是确保中药科研结果可靠,确保中药质量的必不可少的工作。中药鉴定工作者将在继承有价值的传统鉴别技术的基础上,不断研究和发展实用的中药现代鉴别技术,使中药鉴定的内容和方法更为丰富、完善,并不断推广和市场化,以满足中药事业发展的需要。

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Development history of methodology of Chinese Medicines′ Authentication

CHEN Ke-li1*, HUANG Lin-fang2, LIU Yi-mei1

(1.Development of Pharmacy, Hubei University of Chinese Medicine, Wuhan 430065, China;

2.Institute of Medicinal Plant Development.Chinese Academy of Medical Sciences &

Peking Union Medical College, Beijing 100193, China)

[Abtract] This paper reviewed the emergence process of the subject and methodology of Chinese Medicines′ Authentication. Based on the research progress and major achievements acquired in research of each methodology including identification of origin, description, microscopic, physical, chemical and biological characteristics of Chinese medicines, it is expounded that the development process of each methodology combined modern digital technology, information science and its own characteristics. And the development direction is further described for methodology of Chinese Medicines′ Authentication towards systematization and informationization.

中药鉴定技术论文范文第6篇

中图分类号:G42

文献标识码:A

文章编号:1673-7717(2007)04-0806-01

中药历史悠久,并且具有疗效好、毒副作用小的特点,因此很受广大患者欢迎,有很大的市场,这就导致了一些不法药贩制假贩假,以假冒伪劣的药材冒充正品,来追求经济利益;同时由于中药人员素质低下,真伪不辨等原因导致品种混乱,引起中药质量下降,影响了临床用药。由此可见,提高中药人员的综合素质,对把握中药质量,保证临床用药安全、有效是十分重要的。

中药人才的培养是长期理论教育和实践经验相结合的结果,而目前中药人才主要依靠学校的培养,实践中的锻炼,因此学生在学校期间如何结合实际进行教育是十分重要的。要达到这个目的,就要求教师在教学过程中,既要教授学生们理论知识,又要与中药市场相结合教授鉴别方法和技能,才能培养出能很快适应市场需要的综合性人才。为了达到此目的,笔者在《中药鉴定学》教学过程中采取了如下的教学手段和方法。

1教学方法

1.1课堂讲授由于《中药鉴定学》总论部分主要介绍了概念、任务、鉴定方法和当前新技术、新方法等内容,因此这部分主要采取教师讲授为主,在讲授基本理论的同时,也接受一些当前中药鉴定的新技术和新方法,为以后更进一步的学习打下基础。如生物效应法、中药指纹图谱法、电泳分析法、分光光度法及基因鉴定法等。

以基因鉴定法为例,主要讲授的内容有DNA(去氧核糖核酸)遗传标记鉴定法。DNA分子是有G、A、C、T 4种碱基构成,物种遗传上的差异主要表现在四种碱基排列顺序的不同,比较物种间DNA分子的遗传多样性的差异来鉴别物种就是DNA(去氧核糖核酸)遗传标记鉴定法。特点:遗传的稳定性;遗传的多样性;化学的稳定性。方法①聚合酶链式反应(PCR)。②限制性内切酶酶切片段长度多态性(RFLP)。③随机扩增多态性DNA(DNA,RAPD)和任意引物两种技术。④DNA测序方法。应用:野生和栽培。道地和普通药材。

通过上述的讲授,使学生在掌握基本理论的同时,了解当前中药鉴定技术的发展情况。

1.2互动式教学《中药鉴定学》是一门实践性很强的应用性学科,它要求学生们要有直观认识,需要大量的中药材真伪品标本的对照学习,因此在教学过程中主要采取了如下的方法:①以学生为主体,就是将学生划分成几个小组,将本堂课要讲授的中药材标本发下去,让学生对照书本学习,归纳出鉴别要点,教师根据学生们的讲述进行归纳总结;②以教师为主体,以学生为辅,先让学生们反复观看真伪品标本,然后教师提问。这样可以加深学生们对中药材鉴别要点的掌握和理解。

1.3讨论式教学为了提高学生们的鉴别能力,使学生们能够了解中药市场的现状,适应社会需求,教师经常到中药市场收集混淆品和伪品,也让学生们利用业余时间到市场去了解市场情况,对于一时难以鉴别的中药,让学生们查资料,作各种鉴别,然后互相讨论,达到鉴别的目的。如有的学生就利用业余时间到中药市场了解情况,然后请老师一起到现场,受到了良好的效果。

1.4开放式教学由于中药鉴定是一个长期而艰巨的任务,其实践性很强,因此必须充分的利用现有的条件,便于学生们的学习。①开放实验室,要想学好中药鉴定学,必须接触实际,而开放实验室能够保证学生接触大量的中药标本,同时补充实验课时间不足的问题,进行显微鉴别和理化鉴别的技能锻炼,提高学生动手的能力,在给2002级讲授该课程时,就进行了40多学时的实验室开放,收到了良好的效果。②开放时间,主要体现在两个方面,一是每周确定2课时的辅导时间,以学生自学为主,老师辅导为辅,二是老师的时间开放,学生可以随时随地向老师请教,包括学生在市场发现一时难以鉴别的中药真伪品,都可以请老师到市场现场鉴别。③利用课余时间,带领学生到大黑山进行野外教学,使学生能够更好地掌握其形态鉴别、生长环境、采集时间、加工方法、资源保护、开发利用等方面的知识。

2教学手段

2.1利用多媒体课件《中药鉴定学》由于实践性很强,而标本又有限,为了使学生能够更好的学习和掌握中药鉴定的基本方法,利用计算机辅助教学,能形象而真实的展现出中药的鉴别要点,提高教学质量。为此我们根据国家“十一五规划教材”《中药鉴定学》制作教学课件,该课件包含了《中药鉴定学》所有的药材,以彩色图片为主,主要内容有来源、性状鉴别要点,显微特征、伪品。在教学中受到了较好的效果。

2.2利用创新和科研为了提高学生们在这方面的科研能力,让学生们加入到创新和科研当中,通过创新和科研提高学生们科研意识以及了解和掌握科研方法,以提高学生们的综合素质。

中药鉴定技术论文范文第7篇

关键词:中药鉴定;分子生物学技术;免疫法;综述

 近年来,许多新学科理论和试验技术不断渗透到中药鉴定领域,中药鉴定技术有了一定的发展,现综述如下。

1  聚类分析法

    聚类分析是按照对象的定性或定量特征进行分组归类的一种现代统计方法。选取不同的模糊相似系数或长短距离计算公式,将一批样品或变量进行数据处理,得到不同的动态聚类图,从数图上即可分类、鉴定和评价药材质量。经李慧珍等[1]对马勃等18种真菌显微特征聚类分析、苏薇薇[2]以砂仁及其伪品的紫外光谱为量化特征在计算机上用聚类分析法进行分析的实践,证明该法的实验结果与传统的生物学方法吻合,显示了该技术在中药鉴定中的广阔前景。常璇等[3]利用此法对宁夏中宁县、平罗县两地枸杞中铜、锌、锰、锗、硒、砷等6种微量元素的含量进行了综合评价,以比较研究不同产地之间的枸杞。聚类分析结果表明,该法在整体水平上可区分不同产地枸杞中6种元素含量,误判率为0。提示经过更多的验证之后,在不同省区枸杞之间进行聚类分析比较研究,可为枸杞道地性质量标准的制定提供有价值的理论依据。张水寒等[4]应用系统聚类法,对20批关黄柏样品的HPLCFP中各特征峰的相对峰面积进行分析。聚类结果显示16、17、18、19、20号样品为道地药材样品,质量均较好,且以湖南的道地药材样品为好。此方法可用于中药的鉴别,方法较为简便,且样品处理较简单,这将对中药质量的规范化起到一定的积极作用。

2  指纹图谱法

    中药指纹图谱技术[5]是指某中药材或中成药中所共有的,具有特征性的某类或几种成分的色谱或光谱的图谱。即用一定的方法(如HPLC、GC、TLC、HPLCMS、GCMS、FTIR、Xray和UV等),对特定的对象(如中药材、提取物、饮片、注射液等)和过程进行分析,得到的有特征性的相对稳定的图谱。其最大的特点就是通过指纹图谱的特征性,有效鉴别样品的真伪。目前使用最多的中药化学指纹图谱是采用HPLC法[6],可提供大量的信息,符合中药复杂体系研究的需要。

3  免疫法

    不同的动植物药材含有不同的特异蛋白,免疫鉴别即利用该蛋白制备的特异抗体与待检品中的特异抗原结合产生沉淀反应来鉴别药材的真伪。该技术适用于动物药材的鉴别,尤其是亲缘关系比较接近的动物药间的鉴别[7]。国内学者[8]采用免疫电泳法及琼脂免疫扩散法准确鉴定了虎、豹等多种动物的骨骼,还能将豹骨进一步鉴定为雪豹、石豹或金钱豹,说明免疫鉴别方法是一种特异性很强的鉴别法。

4  DNA分子遗传标记技术

    分子标记技术也称DNA分子诊断技术,是基于研究DNA分子由于缺失、插入、易位、倒置、重排或由于存在长短与排列不一的重复序列等机制而产生的多态性的检测技术[1]。现代分子生物学研究发现,中药材(不含矿物药)物种的多样性是由于其基因多态性的结果,而基因多态性可在分子水平上检测,它比在形态、组织和化学水平上检测更能代表其变异类型的遗传标记。由于DNA分子标记直接分析的是生物的基因型而非表现型,鉴别结果不受环境因素、样品形态(原品、粉状或片状)和材料来源的影响,因此可为中药品种鉴别提供更加准确可靠的手段。如:限制性片断长度多态性分析技术(RFLP);多聚酶链反应(PCR)测序技术;随机引物PCR技术(RAPD); DNA序列标记技术等。

   

综上所述,现代中药鉴定学发展的目标是:建立包括聚类分析、基因组成特征、指纹图谱法、等多层面的中药鉴定学科体系,同时通过这种学科体系建设,为寻找和扩大新药源提供可靠的指导资料。

【参考文献】

 

[1]李慧珍,李水福,胡清宇,等.马勃类18种真菌显微特征的聚类分析[J].基层中药杂志,1996,10(3): 8.

[2]苏薇薇.聚类分析法在砂仁及其伪品鉴别分类中的应用[J].数理医药学杂志,1998,11 (2): 158.

[3]常璇,胡奇林.用聚类分析方法对宁夏中宁县和平罗县枸杞中6种元素综合指标的比较研究[J].宁夏大学学报(自然科学版),2006,27 (3): 248.

[4]张水寒,郭伟伟,蔡光先.HPLC指纹图谱结合系统聚类法对不同产地关黄柏药材的分析研究[J].科技导报,2006,24(9): 53.

[5]王睿,徐伟,方翼,等.中药指纹图谱研究进展[J].中国药师,2004,7(10):764767.

[6]路飚,彭咏梅.HPLC法测定心脑健滴丸中儿茶素和表儿茶素的含量[J].湖南中医杂志,2007,23(1):7878,83.

中药鉴定技术论文范文第8篇

【关键词】中药鉴定;分子生物学技术;免疫法;综述

近年来,许多新学科理论和试验技术不断渗透到中药鉴定领域,中药鉴定技术有了一定的发展,现综述如下。

1聚类分析法

聚类分析是按照对象的定性或定量特征进行分组归类的一种现代统计方法。选取不同的模糊相似系数或长短距离计算公式,将一批样品或变量进行数据处理,得到不同的动态聚类图,从数图上即可分类、鉴定和评价药材质量。经李慧珍等[1]对马勃等18种真菌显微特征聚类分析、苏薇薇[2]以砂仁及其伪品的紫外光谱为量化特征在计算机上用聚类分析法进行分析的实践,证明该法的实验结果与传统的生物学方法吻合,显示了该技术在中药鉴定中的广阔前景。常璇等[3]利用此法对宁夏中宁县、平罗县两地枸杞中铜、锌、锰、锗、硒、砷等6种微量元素的含量进行了综合评价,以比较研究不同产地之间的枸杞。聚类分析结果表明,该法在整体水平上可区分不同产地枸杞中6种元素含量,误判率为0。提示经过更多的验证之后,在不同省区枸杞之间进行聚类分析比较研究,可为枸杞道地性质量标准的制定提供有价值的理论依据。张水寒等[4]应用系统聚类法,对20批关黄柏样品的HPLCFP中各特征峰的相对峰面积进行分析。聚类结果显示16、17、18、19、20号样品为道地药材样品,质量均较好,且以湖南的道地药材样品为好。此方法可用于中药的鉴别,方法较为简便,且样品处理较简单,这将对中药质量的规范化起到一定的积极作用。

2指纹图谱法

中药指纹图谱技术[5]是指某中药材或中成药中所共有的,具有特征性的某类或几种成分的色谱或光谱的图谱。即用一定的方法(如HPLC、GC、TLC、HPLCMS、GCMS、FTIR、Xray和UV等),对特定的对象(如中药材、提取物、饮片、注射液等)和过程进行分析,得到的有特征性的相对稳定的图谱。其最大的特点就是通过指纹图谱的特征性,有效鉴别样品的真伪。目前使用最多的中药化学指纹图谱是采用HPLC法[6],可提供大量的信息,符合中药复杂体系研究的需要。

3免疫法

不同的动植物药材含有不同的特异蛋白,免疫鉴别即利用该蛋白制备的特异抗体与待检品中的特异抗原结合产生沉淀反应来鉴别药材的真伪。该技术适用于动物药材的鉴别,尤其是亲缘关系比较接近的动物药间的鉴别[7]。国内学者[8]采用免疫电泳法及琼脂免疫扩散法准确鉴定了虎、豹等多种动物的骨骼,还能将豹骨进一步鉴定为雪豹、石豹或金钱豹,说明免疫鉴别方法是一种特异性很强的鉴别法。

4DNA分子遗传标记技术

分子标记技术也称DNA分子诊断技术,是基于研究DNA分子由于缺失、插入、易位、倒置、重排或由于存在长短与排列不一的重复序列等机制而产生的多态性的检测技术[1]。现代分子生物学研究发现,中药材(不含矿物药)物种的多样性是由于其基因多态性的结果,而基因多态性可在分子水平上检测,它比在形态、组织和化学水平上检测更能代表其变异类型的遗传标记。由于DNA分子标记直接分析的是生物的基因型而非表现型,鉴别结果不受环境因素、样品形态(原品、粉状或片状)和材料来源的影响,因此可为中药品种鉴别提供更加准确可靠的手段。如:限制性片断长度多态性分析技术(RFLP);多聚酶链反应(PCR)测序技术;随机引物PCR技术(RAPD);DNA序列标记技术等。

综上所述,现代中药鉴定学发展的目标是:建立包括聚类分析、基因组成特征、指纹图谱法、等多层面的中药鉴定学科体系,同时通过这种学科体系建设,为寻找和扩大新药源提供可靠的指导资料。新晨:

参考文献】

[1]李慧珍,李水福,胡清宇,等.马勃类18种真菌显微特征的聚类分析[J].基层中药杂志,1996,10(3):8.

[2]苏薇薇.聚类分析法在砂仁及其伪品鉴别分类中的应用[J].数理医药学杂志,1998,11(2):158.

[3]常璇,胡奇林.用聚类分析方法对宁夏中宁县和平罗县枸杞中6种元素综合指标的比较研究[J].宁夏大学学报(自然科学版),2006,27(3):248.

[4]张水寒,郭伟伟,蔡光先.HPLC指纹图谱结合系统聚类法对不同产地关黄柏药材的分析研究[J].科技导报,2006,24(9):53.

[5]王睿,徐伟,方翼,等.中药指纹图谱研究进展[J].中国药师,2004,7(10):764767.

[6]路飚,彭咏梅.HPLC法测定心脑健滴丸中儿茶素和表儿茶素的含量[J].湖南中医杂志,2007,23(1):7878,83.

中药鉴定技术论文范文第9篇

关键词:LAMP;中药材;掺假;检测;应用

中图分类号: R282.5 文献标识码: A DOI编号: 10.14025/ki.jlny.2016.09.053

“一物有谬,便性命及之”,药材真伪不仅关乎治疗效果,而且还关乎患者生命[1]。由于中药材掺假事件频发,药材安全问题日益严重[2],而传统中药材掺假检测方法,如性状鉴别、分光光度法、色谱法等,已无法满足检测的要求。近20年间,国内外学者一起致力于运用生物技术对中药进行研究,尤其是分子标记技术在中药鉴定中的应用是目前最令人鼓舞的进展之一[3]。本文针对LAMP技术在中药材掺假检测方面的应用进行研究,旨在为LAMP技术在中药材掺假检测中更好的应用提供一定的帮助。

1 LAMP技术介绍

LAMP技术是Notomi等在2000年建立的一种新的体外扩增特异DN段的分子生物学技术[4],在65℃恒温条件下几十分钟即可完成核酸扩增。

2 LAMP技术在中药材掺假检测方面的应用

2.1用于人参掺假检测

人参在《神农本草经》中被列为上品,具有大补元气、强心固脱、安神生津的功效,自古以来,价格较昂贵,因而出现了许多伪品[5]。明代李时珍对沙参、荠尼乱人参析之颇详,足见人参伪品古亦有多种。

赵源等[6]以线粒体基因 nad1为靶基因设计特异性引物,建立了人参的LAMP检测方法,能够在1小时内完成检测,灵敏度比常规PCR 高10倍,经验证能够区分人参及其近缘种,以及人参制品及其常见伪品。

2.2用于冬虫夏草掺假检测

冬虫夏草一直被列为滋补品之首,并有“东方传奇式珍宝”之美誉[7]。市场上常见的混淆品为有凉山虫草、蛹草、分枝虫草等。

李奎等[8]将包括冬虫夏草在内的6种不同虫草进行LAMP扩增,建立了冬虫夏草的环介导等温扩增快速检测方法。

2.3用于金银花掺假检测

山银花等与金银花的原植物是近缘种,性状特征与金银花相似,当金银花价格升高时,部分商家常以山银花充当金银花进行销售,谋取利润[9]。

蒋超[10] 建立了快速、简便、现场化的金银花分子鉴别方法,当温度为65℃时,能鉴别金银花与其同时伪品,解决了金银花分子鉴别中操作复杂,检测时间长的问题。

2.4 用于钩吻掺假检测

钩吻是马钱科植物葫蔓藤的全草,又名断肠草、野葛、毒根、大茶药等,由于有剧毒,民间一直以外用为主,忌内服,多为捣碎或研磨后调敷患处,也可以煎水洗或烟熏,具有祛风散寮、消肿止痛、攻毒杀虫的功能[11]。

余淑琳[12]等采用改良CTAB法提取钩吻、金银花和山银花的总DNA,利用PCR反应对psbA-trnH和trnL-trnF序列进行扩增,设计钩吻LAMP引物,从而成功鉴别出钩吻和金银花类药材及其水提液。

3 LAMP技术的优点

在中药材掺假检测方面, LAMP技术具有较强的特异性、较高的灵敏度和较快的检测速度。赵源等[6]建立的人参的LAMP检测方法,能够在60分钟内完成检测。综合各文献数据,可得出结论:LAMP技术用于中药材鉴定领域的基本反应可以在60~90 分钟内完成,如果加入环引物,则能使反应时间缩短为30~45分钟。李奎等[8]建立的冬虫夏草的环介导等温扩增快速检测方法,LAMP最低检出限达6 pg/mL。综合各文献数据,可得出结论:与PCR鉴定方法相比,LAMP鉴定灵敏度通常是常规PCR的10~100倍。LAMP检测不需要复杂的仪器设备,检测现场只需配一台普通的水浴锅,就可以完成中药材的掺假检测,对于农村、基层非常适用。

4 结语

LAMP检测技术适用于进行中药材掺假的实时定性检测。相信随着LAMP检测技术的发展和研究的深入,在未来,它必将在中药材掺假检测方面有更好的应用,也必将推动中药材掺假检测技术朝着更便捷、更廉价、更准确的方向发展。

参考文献

[1]蒋超,黄璐琦, 袁媛,等. 金银花中几种分子的真伪鉴别方法比较及其研究进展[J].世界科学技术―中医药现代化,2014,16(08):1831-1837.

[2]瘳保生,宋经元,谢彩香,等.道地药材产地溯源研究[J].中国中药杂志,2014,39(20):3881-3888.

[3]黄璐琦,袁媛,袁庆军,等. 中药分子鉴定发展中的若干问题探讨[J].中国中药杂志,2014,39(19):3663-3667.

[4]何晓华,顿玉慧,卢力,等.环介导等温扩增技术在肠杆菌科致病菌检测中的研究进展[J].食品科学,2014,35(19):312-317.

[5]尹青青.人参及其伪品鉴别[J].中国误诊学杂志,2007,7(13):3044-3045.

[6]赵源,宋云,李明福,等.基于LAMP的人参物种鉴定技术的研究[J].植物检疫,2015,29(05):30-34.

[7]刘春泉,宋江峰,李大婧,等.北冬虫夏草多糖组分的分离纯化及结构研究进展[J].食品科学,2007,28(01):370-373.

[8]李奎,李琦,袁媛,等.环介导等温扩增法鉴定检测冬虫夏草[J].中草药,2011,42(08):1605-1608.

[9]汪楠楠,周建理, 杨青山,等.市售金银花及其混伪品的微性状鉴别[J].安徽医药,2014,18(03): 450-452.

[10]蒋超.中药现场快速鉴别方法的建立――以金银花为例[D].北京:中国中医科学院,2010.

中药鉴定技术论文范文第10篇

[关键词] 中药学研究生;分子生物技术;知识结构;医学教育

[中图分类号] G643 [文献标识码] C [文章编号] 1674-4721(2012)02(c)-0153-02

Improve the knowledge structure of graduates by strengthening the study of molecular biotechnology

WANG Lili DAI Liping CHEN Suiqing

Pharmacy College of Henan University of TCM, Zhengzhou 450008, China

[Abstract] In order to improve the knowledge structure, research and innovation ability of graduates who major in traditional Chinese medicine, a variety of ways and means were performed to enhance their study in molecular biotechnology, these ways include basic theory strengthening, experimental ability training, cooperation with enterprise etc..

[Key words] Graduate; Molecular biotechnology; Knowledge structure; Medical education

几千年来,中医药已形成独特的、系统的医药学理论,其中,中药学传统理论是中药体系中不可或缺的重要组成部分,是中药学教育的核心体系。但是如果我国的医药教育尤其是中药研究生教育仍停留在传统的中药学知识教育的层面上,将会面临知识结构落伍的困境。目前,大量在读硕士研究生已逐渐成为中药科技创新体系中的生力军,因此,研究生教育关系到国家自主创新能力的提升,意义重大[1]。当今分子生物技术、基因工程技术的发展日新月异,为中药的发展增添了新的驱动力。以中药材为例,分子生物技术在中药栽培、育种,建立动植物基因库,稀缺天然成分的转化,贵重药材的分子鉴别,药材的种质资源研究等方面取得了重大进展。因此,加强对现代分子生物学技术的研究,从基因水平上对中药材进行分析和鉴别,是现代研究生需要掌握的一项基本技能。在《中国药典》2010年版中已经收载了蕲蛇和乌梢蛇的聚合酶链式(PCR)的鉴别方法[2],由此可见,生物技术已经成为中药研究生教育的必修课。为了培养和促进研究生对现代生物技术的掌握,本研究室为中药学专业研究生开辟了多条途径,以期能够完善其知识结构,提高其科研能力和水平。

1 加强基础生物学课程的学习

由长期在科研和教学一线工作的教师来进行《现代生物技术》、《分子生药学》和《生物工程技术概论》等基础课程的讲授,注重基础理论知识和基本理论的讲解。由于生物技术发展迅速,时效性较强,任课教师应及时查阅国内外该学科的新进展、新技术、新方法,并对这些新技术、新方法进行大致分析与介绍,突出其在中药研究中的意义,尽可能使课程内容与最新的前沿研究同步,使研究生尽可能接触最新的研究进展,拓宽科研思路。同时,本学科的发展和分子生物技术的结合应该作为重点内容来讲述。以中药质量标准为例,分子生物学手段特别是DNA分子遗传标记技术,可从分子水平鉴别药材主流品种及其种下等级的遗传背景差异,为生药品种标准化提供先进可行的方法和稳定可靠的标准,进而为中药质量标准规范化奠定坚实的基础。近年分子诊断技术也广泛应用于生药的鉴别中,限制性片段长度多态性(RFLP)分析、随机扩展多态性DNA(RAPD)分析、扩增片段长度多态性(AFLP)技术等的出现,为生药的鉴别特别是贵重药材的鉴别提供了分子水平的依据。与此同时,应该培养研究生的阅读能力,为其介绍国内外一流的分子医药学期刊及网站,加强其文献检索的能力,扩大其眼界和知识面。

2 通过多种途径,培养研究生的动手能力

动手能力是科研能力的重要保证之一,是实验研究能力和实验创新能力的基础。为了提高研究生的实际操作能力,使研究生在理论学习阶段提前进入实验室进行实际操作训练。本校中药学实验室开展了分子中药鉴定、细胞培养等多个方向的研究生课题,使研究生在学习理论知识的同时,了解PCR扩增、蛋白质电泳、植物愈伤组织培养、细胞培养等的基本原理和操作规程,从而提高理论和实际动手能力,在实际操作中,发现问题,解决问题,提高科研能力和水平。以PCR扩增为例,首先需要了解微量移液器、PCR扩增仪等仪器的使用方法,该实验实际操作过程繁琐,试剂种类较多,试剂量是以微升进行计量,加入量有时肉眼难以看到,对操作者要求较高。因此,必须对研究生进行实验操作规程和技能的训练,培养其观察和分析问题的能力,使其能够独立解决实验过程中出现的异常现象和问题,增强科研实践和创新能力。

3 加强与外单位科研院所合作交流

定期选派研究生赴中国医学科学院等合作单位进行中药生物工程技术方面的学习与交流,鼓励和支持研究生参加高水平学术交流活动,为研究生提供更多更优质的创新平台与机会。充分利用校外优质资源, 扩大学校与政府、科研院所、企事业单位的研究生联合培养,加强教育科研资源的整合,科学发挥科研中心的高层次教育功能,加强与生物医药公司的合作,形成产、学、研一条龙,共同培养中药行业需求的高层次应用型、复合型人才。

4 组织研究生到生物制药企业、农业生物园区等参观见习

为了使研究生加深对生物药品生产过程的了解,应该组织研究生到生物制药企业进行参观见习,提供企业和研究生深层次交流的机会。通过这样的交流,研究生可以更多的了解企业需求,针对企业生产过程中需要的知识进行学习调整,使研究生明确如何适应企业要求找到适合自己的岗位,为以后顺利就业打下基础。企业也可以把技术革新等方面的需求反映给研究生,增强研究生的创新实践能力,为其研究思路指明方向。通过参观学习,可以开拓研究生的思维,刺激其学习兴趣,增强其在实用技术方面创新的能力。这样既增加研究生的就业机会,也使企业得到充足的人才储备,达到校企双赢。

研究生学习阶段的一个重要任务就是拓宽研究视野,结合自己的研究方向及时更新和调整知识结构,及时把握本学科发展的大致方向与研究方法。随着现代生物工程技术的发展,一批新兴的交叉学科应运而生,中药的研究也面临着诸多挑战[3-4],生物工程技术发展使中药栽培、中药鉴别等达到了分子及细胞水平,因此,加强分子生物技术的学习,对中药学研究生知识结构的构建有着重大意义。

[参考文献]

[1] 段文卓,孙宏伟. 提高普通高校研究生培养质量方法初探[J]. 中国高等医学教育,2010(10):108.

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[M]. 北京:中国医药科技出版社,2010.

[3] 肖培根,王永炎. 加速中药研究的创新步伐[J]. 中国中药杂志,2010, 35(16):1047.

中药鉴定技术论文范文第11篇

【关键词】中药库房管理;中药鉴定;作用分析 文章编号:1004-7484(2013)-12-7409-02

中药库房管理直接决定临床中药用药的安全,在医院管理中起着举足轻重的作用,其中涉及中药的采购、中药入库检验、分类储藏、仓库设备维护及药品领用情况记录等[1]。中药鉴定主要是鉴定中药的品种和质量,制定中药材标准,关系到中药的采购和入库检验,是中药入库的质量命脉,在中药库房管理中显得尤为重要。通过严格的中药鉴定可以杜绝或最大程度减少伪劣中药入库,保障临床应用中药的安全性,提高医疗质量。根据我院近年来中药库管理和中药鉴定的实践经验并结合相关文献资料进行探讨分析,现总结如下:

1注重中药材的来源、道地性

我国中药材种类繁多,资源丰富,几乎每个地区都有其独特的中药材,例如,东北三省有知名的长白山人参,西北地区新内甘宁四区具有丰富的枸杞,西南地区云贵川三省的天麻,广西地区的何首乌以及泰山的白首乌等等[2]。由于中药材的特殊性,即使同一种药材其产地不同,质量也会存在明显差异。这是因为不同地区的土壤成分、水质、日照量、气候、降水量、肥料等等自然条件的差异所致。因此,中药材品种、产地的复杂化致使市场上中药材的质量优劣不等,良莠不齐。这就使临床上形成了使用“道地药材”用药原则。“道地药材”是指产地历史悠久、品种优良、疗效突出,带有地域特点的一些药物,如吉林的人参,辽宁的细辛,云南的三七,内蒙古的甘草、黄芪,四川的川芎、川乌、川贝母,重庆的黄连、陈皮等[3]。选择和使用“道地药材”是保证临床用药效果的重要前提。这就要求中药库房管理人员在进行中药材采购过程中,对药材供应商严格审查,对各种中药材的产地进行备案、审查。提高中药库房相关人员的专业素质,熟悉道地药材相关知识,练好“经验鉴别”基本功,对所采购药材进行有效鉴别。

2对中药材的优劣进行辨别

由于中药材的采收方法与时节、中药材的运输和储存,以及中药材的炮制等诸多因素的不确定性,使中药材的药效、质量不尽相同。近年来,中药材从生产、加工到运输、储存的成本提高,使中药材的价格有所提高,特别是紧缺和贵重的中药材。在金钱利益驱使下,一些不法分子在中药材的生产销售过程中造假掺假。例如,假川贝母、假制龙齿、假沉香等,还有用杏果经过加工假冒乌梅,银子草的根假冒柴胡等,更有甚者使用苹果皮和山楂皮来制造板蓝根冲剂等等。所以,中药库管理人员在中药材的采购过程中就应进行严格鉴定,防止伪劣药材入库,保证中药材的质量。

3传统中药鉴定方法的应用

传统中药鉴定方法包括来源鉴定、性状鉴定、理化鉴定、显微鉴定等四种[4],被称为中药材鉴定四大传统方法。首先鉴定来源,中药材大多为植物,对中药材的根、茎、叶、花、果实等仔细观察、鉴别,必要时可以与标本进行参照对比,确定中药材的具体学名,然后根据矿物学中的相关知识确定中药材的来源。比如,临床用药上,在外观凌霄花以及洋金花相似度非常高,不过凌霄花为茄科,二强雄蕊,两长两短,花丝弯曲;洋金花也为茄科,但属于离心雄蕊,等长,花丝通直。故而对两种药物进行鉴别是,需要对雄蕊的数目以及形态予以认真地观察和鉴定[5]。性状鉴别是中药材鉴定的主体。人们凭借药材的外观性状特征来判断中药品种质量的真伪优劣,即为中药性状鉴别,又称经验鉴别。经验鉴别一般包括“形状大小表面颜色质地,断面气味水火试”等方法,是通过眼看、手摸、鼻闻、口尝、水试、火试等十分简便的手段来鉴别药材的外观形状特征,进而区分药材真伪优劣的方法[6]。经验鉴别简便易行,不需要现代化的设备,广为中药材鉴定工作人员采用。经验鉴别要求工作人员具有扎实的专业知识和丰富的鉴别经验。许多临床常用的中药可凭经验进行直观的性状鉴定来进行区分如黄连、玄胡等;有些中药材可用水试方法来鉴别,如西红花泡入水里后可形成黄色溶液、秦皮浸泡后的浸出液日光照射下可呈碧蓝色荧光、苏木在热水中变成红色等;部分中药材可用火试的方法进行鉴定,如海金砂点火发出爆鸣声;青黛燃烧冒出紫红色烟雾;当进行性状鉴定不能区分中药材时,就要使用显微鉴定等方法进行区分,如粉末药材、花粉类中药等[7]。李洁[8]运用显微鉴定技术鉴别松花粉与蒲黄,可用于识别中药材掺伪现象,如鉴别麝香仁中有无掺入荔枝核粉等。中药材的显微鉴定是指用显微镜对药材的组织切片、粉末、组织或者表面制片进行观察,以鉴定中药材的真伪、品质。理化鉴定是指用化学或物理的方法,对药材中所含某些化学成分进行定性和定量分析的鉴别试验,以鉴别药材的真伪、纯度和质量的优劣,一般应用于含不同化学成分的形状相似而又无明显显微鉴别特征的药材[9]。

4现代科技中药鉴定新技术的应用

现代科技中药鉴定技术在很多方面可以弥补传统中药鉴定方法的不足,中药库房管理中应高度重视,并根据实际情况积极开展应用。中药材品种多样,有些相差甚微,且经过加工炮制之后一些药材的性状发生明显改变,使鉴定分辨工作更加困难,仅凭传统的中药材鉴别已经不够满足临床的需要。现代科学技术的发展为中药材的鉴定提供了有力的武器,也为中药材处理仪器与技术的进步提供了很大帮助,摧动中医药事业走向标准化、高速化、信息化进程。现代科技中的中药材鉴定新技术主要包括:①色谱法:包括薄层色谱法(TLC)、薄层扫描法(TLCS)、高效液相色谱法(HPLC)、气-相色谱法(GC)、气质联用法(GC/MS);②光谱法:包括紫外光谱法(UV)、导数光谱法(DS)、红外光谱法(IR)、荧光光谱法(PF)、核磁共振光谱法(NMR)、质谱法(MS);③X衍射分析法(XRO);④差热分析法(DTA);⑤分子生物学技术:包括多聚酶链式反应(PCR)、随机扩增DNA法(RAPD);⑥扫描电镜技术(SEM);⑦计算机图像分析技术(CIA);⑧电泳法(EP):包括毛细管电泳法(CE);⑨多元回归分析;⑩电分析法(EA):包括示波极谱法、等电点法;11X射线荧光光谱法[10]。目前,色谱法和光谱已经在中药材的鉴定中得到广泛应用。王建云等以梅花鹿血、鹿鞭、鹿茸、毛为鉴定对象,采用微量DNA提取技术以线粒体DNA Cytb通用引物L14841和H15149扩增约307bp的DN段,扩增产物纯化后用双脱氧链终止法测定其序列,得出梅花鹿毛、血、鹿鞭的DNA序列完全一致的结果,证明其来源都是梅花鹿,而鹿茸由于其来源不详,与其他的梅花鹿DNA具有明显的差异[11]。这些新技术在临床的应用更加确保并提高了对中药材的鉴定分辨水平。

近年来提出的中药系统鉴定法使中药材的鉴定达到一个更系统、精切、科学的水平。中药系统鉴定法(systematic identification of Chinese material medica,SICMM),指基于DNA测序技术及开放的DNA数据库,结合传统的中药性状鉴别、显微鉴别和理化鉴别等多种技术手段,对未知药材、饮片及其粉末等的基原和真伪,进行多方法、多角度的作证和鉴别,达到中药鉴定客观化、标准化和精确化的目的[12]。该方法系统整合了多学科的知识和技术,将经验和技术,传统和现代,微观与宏观完美结合,使中药材鉴定实现准确、客观。

总之,中药材鉴定在医院中药库房管理中起到决定性作用。传统的中药材鉴定方法与现代科技中药材鉴定的新技术、新方法相结合,可以相互补充,多途径、全面的对中药材进行确切的分类、鉴定和评价,以保证临床中药材的优良性和道地性,提高临床疗效及安全性。所以,应该重视中药鉴定在中药库房管理中的作用,严格执行。

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中药鉴定技术论文范文第12篇

关键词:中草药栽培与鉴定 订单式 培养模式

中图分类号:G6423 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2016)10(a)-0181-02

中医药行业现已成为我国区域经济发展的支柱产业,十报告明确指出:扶持中医药和民族医药事业发展。但伴随着中草药产业飞速发展的同时,在中药资源保护、种植培育、质量鉴定等方面的问题也日趋严峻,如因对野生药用资源的过度开发等造成一些宝贵的中药材资源日趋枯竭,部分种类甚至濒临绝灭;大宗中药材品种的种植与培育技术不成熟;中药材品种混乱、质量参差不齐等。

1 中草药栽培与鉴定专业开设的现状

在我国各大中医药院校中绝大多数虽已开设了中药学专业,但培养方向上主要立足于能在中药生产、检验、流通、使用和研究与开发领域从事中药鉴定、设计、炮制、制剂及临床合理用药等方面工作。这样的中药学人才已不能完全满足中药产业发展的要求,也不能很好地解决与之带来的问题,尤其在国家颁布GAP以后,中药材的栽培与鉴定技术人员越发显得重要,中医药企事业单位更加需要既懂药用植物栽培生产技术,又懂质量检测、鉴定等理论与技术的新型的复合型人才。2001年甘肃中医学院成为我国首个开设中草药栽培与鉴定专业的中医药院校,开设此专业旨在培养系统掌握中草药栽培、资源保护、开发利用、质量鉴定、中药饮片加工、中药材流通、教学科研等工作的应用型人才,这是对原有中药学专业在培养专门人才方面所存在缺憾的有益补充。至今,我国已有11所高等院校和5所高职院校开设了中草药栽培与鉴定专业,但目前绝大多数高等院校在人才培养、教学等方面还是停留在以其自身作为教育主体,以课堂理论教学为主线,辅以课外实践或见习,这样的培养模式在一定程度上不符合中草药栽培与鉴定专业本身所特有的实践性强、操作性强、应用性强等特点,此模式培养下的学生缺少了感官的认知,缺少了实际动手操作的机会,没法很好地运用于实际中,更不能很好地指导农民科学规范种植和鉴别中药材。

2 “订单式”人才培养模式的研究概况

“订单式”人才培养模式源于国外“Cooperative Education”,即“合作教育”。早在20世纪初,美国辛辛那提大学就开始了这种教育模式的尝试,并很快在美国及其他国家的高校和企业中广泛应用。目前全球越来越多的教育机构也开始采取这种合作教育模式。随着经济社会发展对应用型人才需求的加大,近年来,“订单式”人才培养在我国职业院校中得到广泛实施和推广,“订单式”培养模式也随之被我国各高等院校和企业所接受并成为我国目前职业教育改革与发展的新动向。

“订单式”人才培养模式是一种校企合作、产学研结合,以就业为导向的人才培养模式,其实质是由学校和企业两个主体在校企两个不同的育人环境中,共同制定人才培养计划,共同开展人才培养工作,培养符合企业需求的复合型人才。目前,在我国“订单式”人才培养模式多数应用于高职院校,在高等院校的各专业中极为少见。

3 中草药栽培与鉴定专业“订单式”人才培养模式的可行性分析

应用型人才培养模式研究始于20世纪80年代,尤其近年来受到我国高等教育界的广泛关注,《国家中长期教育改革和发展规划纲要(2010―2020年)》中也提出了高等教育要“增强社会服务能力”的要求。随着我国高等教育已经由精英式教育转化为大众化教育,人力资源总量正在不断扩大,这意味着大学生的就业也跨入“大众化就业”时代,提出合理创新的人才培养模式成为了有关高等院校与企业的迫切需求。该文阐述了“订单式”人才培养模式的意义,探索“订单式”人才培养模式应用于中草药栽培与鉴定专业的可行性。

3.1 “订单式”人才培养模式能进一步推动我国职业教育的发展

职业教育是以服务为宗旨,以就业为导向,以培养高技能人才为目标,走工学结合的发展道路,紧密结合经济和社会发展需求,坚持培养面向生产、服务等一线需要的“下得去、留得住、用得上”,实践能力强,具有良好职业道德的高素质应用型人才。“订单式”人才培养模式正是企业、学校根据应用型专业的特点而开展的一种针对性的教育培养模式,这能很好地推动我国职业教育的发展。

3.2 “订单式”人才培养模式能为中草药栽培与鉴定专业人才培养提供新的方向

“订单式”人才培养模式可以帮助改进传统实训形式,强化高校人才培养质量,改善了传统教育中所呈现的教育主体单一、教育手段陈旧和教育不够系统化等问题,整合优化了教育资源,在充分发挥了高校教育的作用,同时实现学生、学校、企业、社会多方面共赢,促进了学生实践能力、理论学习和创新能力的提高,这是一条适应新形势下的教育规律和市场规律的人才培养模式,符合中草药栽培与鉴定此类应用型专业的人才培养,能缓解我国当前中药产业存在的突出问题,也为当前高等院校教育注入了新的活力。

3.3 “订单式”人才培养模式能为中草药栽培与鉴定专业就业方向提供新的视野

我国的教育要加强职业教育,要更好地为社会服务,这除了需要“985”“211”类的重点院校和重点专业,更需要一大批应用型院校和专业。在中草药产业和社会经济快速发展的新形势下,中草药栽培与鉴定专业作为一个新兴的应用型专业,面临着巨大的竞争和社会压力。一方面,随着高校毕业生总量不断地攀升,而工作岗位数目的有限,就业的结构性矛盾日益突出,就业压力不断增大。另一方面,随着高新技术的发展和新兴产业的兴起,一些单位需要大量高学历精通尖端技术的应用型人才。在这样的情况下,对中草药栽培与鉴定这样一个应用型的专业,需要实践与理论并行,才能培养出一批较高素质的适应社会需求的应用型人才。通过采用“订单式”的培养模式,能增强人才培养的针对性,缩短毕业生进入企业的磨合期,降低企业到岗培训的成本,解决大学生初涉就业岗位的脱节问题,这是市场经济条件下企I人力资源开发的必然选择,为校企合作找到了最佳的途径,是实现学生与企业、学生与就业岗位“零距离”和缓解“人职不匹配”现象的必然选择。

3.4 浙江丰富的中药材资源有利于中草药栽培与鉴定专业“订单式”人才培养模式的构建

“订单式”人才培养模式的主体除了学校之外,对于专业相关企业或地区的选择尤为重要,而浙江是医药大省,“浙八味”等道地药材享誉海内外,2005年2月,该省启建了中药现代化科技产业基地,2008年开始大大增加了资金的投入,同时,还成立了中药材规范化种植、现代中药安全性评价等8个研究中心,至今该省已有8个GAP种植基地,如,浙江康莱特集团有限公司、浙江寿仙谷生物科技有限公司和北京同仁堂浙江中药材有限公司等,遍布杭州、宁波、温州、台州、丽水等城市。

参考文献

中药鉴定技术论文范文第13篇

【摘要】 目的对DNA分子遗传标记技术在中药材鉴定领域的应用作一综述。方法通过查阅20世纪90年代以来发表的文献进行归纳分析。结果DNA分子遗传标记技术具有微量、快速、特异性强、准确可靠、对样本要求较低的特点;使用较多的方法主要有RAPD、ISSR、ITS标记以及rRNA基因序列分析技术。同时,DNA分子标记技术也存在着使用局限、对实验硬件和从业人员的技术要求高、成本较高、技术复杂度高、对不同部位入药的药材仍然难以区分以及无法用于成药、复方、提取液鉴定等弱点。结论DNA分子遗传标记作为中药材鉴定的方法还有待发展和完善。

【关键词】 DNA分子遗传标记; 中药材; 鉴定

Abstract:ObjectiveThe paper summarizes the researches of application of DNA molecular markers in Chinese medicinal materia.MethodsInduction and analysis were used by referring to literature released since 1990s . ResultsDNA Marker Technologies have characteristics of trace,rapid,peculiarity, accuracy and credibility, lower requirements for the sample. Random amplified polymorphic DNA (RAPD),inter-simple sequence repeat (ISSR), interial transcribed spaoers (ITS) and rRNA gene sequencing technology are often used.However, DNA Marker Technologies have some disadvantages that employees are required special skills,the cost is high and the technique is complicated,while it is difficult to distinguish different parts of Chinese medicinal materia used medicinally and identify patent medicine, Chinese medicine complex prescription and the extract of Chinese medicinal materia. ConclusionThe methods of Chinese medicinal materia identification by DNA molecular markers need to develop and improve.

Key words:DNA molecular marker; Chinese medicinal materials; Identification

针对我国药材种类繁多,来源复杂且品种混淆情况严重的状况, 为了保证临床用药的安全及质量和疗效,广大中医药领域的专家学者多年来一直都致力于寻找更加科学的鉴定方法来解决这一难题。随着当今生命科学不断取得重大突破, 其中分子生物学技术以其准确性高、重复性好等特点尤为引人瞩目。DNA分子标记大致可分3类:首先是以电泳技术和分子杂交技术为核心的分子标记技术,其中代表技术有RFLP分子标记技术;第2类是以电泳技术和PCR技术为核心的分子标记技术,实际使用较多的代表技术为:RAPD、简单序列重复间区标记技术(inter-simple sequence repeat ISSR)和AFLP(Amplified restriction fragment Polymorphism)。第3类是以DNA序列为核心的分子标记技术,其代表性技术有ITS(interial transcribed spaoers)测序分析技术。本文仅就最近十几年来DNA分子标记技术在中药鉴定方面的应用作一分析, 并就其应用前景进行讨论和展望。

1 经典的DNA分子标记技术

此类技术的代表是限制性片断长度多态性 (Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)。

RFLP是最早发展的分子标记,是由Bostein首先提出,Soller和Beckman最先应用于品种鉴别和品系纯度的测定,这是最早发展的分子标记技术。其基本原理是利用限制性内切酶酶切不同个体基因组DNA后,与同位素或非同位素探针标记杂交,从而显示与探针含同源顺序的酶切片段在长度上的差异。RFLP探针的来源主要是RG克隆和cDNA克隆,其中cDNA探针保守性较强,许多同科物种cDNA探针都可以作为通用探针。在实际应用过程中,人们普遍感到经典的RFLP技术须经酶切、电泳、Southern转移、与探针杂交、放射自显影等步骤, 在实际应用中很不方便,费时费力,并受到探针来源的限制,多态性检出效率低(只能检测探针长度内切酶识别位点上的变异)。同时要求的DNA量较大,实验材料必须新鲜, 因此难以适用于干燥药材的鉴定,目前在中药鉴定领域已很少使用,已归为被淘汰的技术。

在多源性中药材如伞形科北沙参、柴胡,菊科苍术属豆科甘草属,羽扇豆属(Lupinus sp.),Yamazaki M,茄科澳茄属(Duborsia s ) Mizukami H,3种苍术Mizukami H的基原鉴定、资源分析及其地理品系(居群)间亲缘关系研究方面有了一些报道。

2 基于PCR的DNA分子标记技术

此类标记技术的代表为:RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、简单序列重复间区标记技术(inter-simple sequence repeat ISSR)和AFLP(Amplified restriction fragment Polymorphism)。

2.1 随机扩增片段长度多态性标记(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)RAPD技术是由美国的Williams与Welsh两个研究小组于1990年同时提出的一种DNA分子标记技术。Williams等称之为RAPD,Welsh等称之为Ap-PCR(arbitarily primed PCR),此技术利用单一的10个碱基寡核苷酸作为引物,对基因组DNA进行PCR扩增,经琼脂糖凝胶电泳来检测DNA序列多态性。RAPD标记只需微量DNA,且对受试基因组无特定要求(不须知道受试基因DNA的背景材料),检测灵敏、方便、多态性强,可以检测出RFLP标记不能检测的重复顺序,可填补RFLP图谱空缺,适用于种质资源的鉴定和分类、目标性状基因分子标记、遗传图谱的快速构建等研究,也可用于亲缘关系等的研究。相对于其他几种分子标记, RAPD标记是在中药鉴定领域用得最多的分子遗传标记技术, 并对中药鉴定研究产生了深刻的影响。RAPD技术自问世以来 ,在中药鉴定中主要用于中药混淆品、代用品的鉴定,多来源中药的鉴定,名贵中药的鉴定,动物类中药的鉴定等。

从1996年以来,黄璐琦等[1~3]等分别对天花粉、西洋参等进行了鉴别研究,证明了RAPD分析法作为鉴别动植物类生药是可行的。

2000~2004年,于燕莉等[4~13]分别对金银花、姜黄属药材和山药、射干类药材射干及混淆品鸢尾、野鸢尾、蝴蝶花、德国鸢尾、近缘物种金线莲母(金线莲) 与金线莲公(无线金线莲)、泽泻、麻黄、灵芝、厚朴、地黄和海风藤等进行了研究,从分子水平定性地揭示道地药材的遗传变异,得出同种异地药材所形成的不同的居群,具有不同的遗传特征。李颖等[14]分别对广藿香和独活药材进行探索, 并建立了鉴别方法。

2.2 AFLP技术扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism, AFLP)标记技术是1993年由荷兰科学家Zabeau和Vos发展起来的一种检测DNA多态性的方法, AFLP是一种RFLP与RAPD相结合而又不使用分子杂交技术的分子标记手段,被誉为新一代的分子标记技术。它的原理是基于对基因组DNA双酶切经PCR扩增后的限制片段进行选择。使用特定的双链接头与酶切DNA片段连接作为扩增反应的模板,用含有选择性碱基的引物对模板DNA进行扩增,选择性碱基的种类、数目和顺序决定了扩增片段的特殊性,所以,只有那些限制性位点侧翼的核苷酸与引物的选择性碱基相匹配的限制性片段才可以被扩增。扩增产物经放射性同位素标记、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,然后根据凝胶上的DNA指纹的有无来检出多态性。由于AFLP预先不需要知道DNA序列的情况,但获得的指纹信息位点要比RAPD技术更为丰富。相比之下。最后完成AFLP实验的成本比用RAPD方法的成本低,更省时间、更方便,而且准确性更高,数据更可靠,技术难度也不大。

2000年以来,马小军等[15~19]用AFLP标记分别对人参、西洋参、石斛以及天麻等进行分析,结果显示,AFLP指纹技术具有稳定性高、重复性好等优点,得到了清晰的AFLP指纹图谱,该体系具有良好的稳定性和重复性。

2.3 ISSR标记技术简单序列重复区间(inter-simple sequence repeat,ISSR)技术又称为锚定简单序列重复技术(anchored simple sequence repeat,ASSR)由加拿大蒙特利尔大学的Zietkiewicz等于1994年提出。它用锚定的微卫星DNA为引物,即在SSR序列的3’端或5’端加上2~4个随机核苷酸,在PCR中,锚定引物可以引起特定位点退火,导致与锚定引物互补的间隔不太大的重复序列间DNA片段进行PCR扩增。所扩增interSSR区域的多个条带通过聚丙烯酰胺凝胶电泳或者琼脂糖凝胶电泳得以分辨,扩增带多为显性表。ISSR标记技术特点:实验操作简单、快速、高效,不需要繁琐地构建基因文库、杂交和同位素显示等步骤。ISSR标记技术结合了RAPD标记技术和SSR标记技术的优点,耗资少,模板DNA用量也少。

2003年以来,此标记技术受到许多学者的青睐,邱英雄等[20~31]分别对明党参和川明参、南北五味子、罗汉果、金花茶、怀区地黄、铁皮石斛和黄精、麦冬、金钗石斛、丹参和半夏等药材的基因组DNA进行PCR扩增,建立并优化了ISSR-PCR反应体系,结果证明ISSR标记可以作为不同产地药材鉴别的有效分子标记。

此外,2008年以来,李磊等[32~36]分别对4种叶型性状半夏和掌叶半夏、山茱萸、银杏、益智和乌头等药材利用ISSR分子标记进行了分析,并取得良好结果。

2.4 DNA序列分析技术以DNA序列为核心的分子标记技术。建立在PCR技术基础之上的DNA测序分析技术(DNA sequencing)的开发使DNA分子标记技术取得了又一次的突破性进展。

动植物在进化过程中,其基因会发生碱基的重排、替代等,从而导致基因序列的差异。通过检测其DNA片段序列的差异,即可将不同的种区别开来。近年来,由于DNA测序技术的发展以及人们对一些基因结构、功能的进化规律认识的更加深入,一些基因已用于动植物的进化与分类、物种鉴别研究。利用已知基因的结构、序列,可以为PCR引物的设计及目的基因的扩增提供前提条件。而基于PCR的DNA直接测序技术,极大地提高了DNA序列分析的效率,促进了该项技术的应用研究。目前用于中药DNA测序的基因主要有植物叶绿体基因组的rbcL,mat K rpoC 等;植物核基因组的rRNA、ITS等;动物线粒体基因组Cytb基因等 ,这些被选基因的共同特点是进化速率差异大,基因序列变异大,基因序列均匀地分布于整个基因组,分辨率高,一般用于种级以上的分类系统研究以及分析研究动植物的亲缘关系与进化等。

马小军等[37~40]2005年分别通过测定山参、大戟、巴戟天以及细辛和柴胡的序列,获得了可喜的效果 。

此外,徐红等[41~47]2004年分别对川芎、西洋参、竹节参、石斛、姜黄、大黄、当归及小秦艽、肉苁蓉、广藿香、太子参、葛根等进行了药材鉴别,根据序列能够将研究对象区别开。

动物类药材多用线粒体细胞色素b基因片段的序列变异鉴别药材。1998年吴平[48]通过分析对乌龟、中华鳖和山瑞鳖线粒体12S rRNA基因片段序列来区分正品和混淆品;还通过扩增约450bp的12S rRNA和约490 bp的Cytb基因片段对海马作了DNA序列分析,可作为其它动物药材干样品鉴定的参考。1999年王义权等[49]扩增了乌梢蛇及其混淆品的Cytb基因片段,通过比较蛇的Cytb基因246 bp的同源DNA序列,可以准确区分乌梢蛇及其混淆品。

3 评价与展望

3.1 评价中药材品质鉴定是中药质量控制的首要环节,多年来人们一直在寻找科学有效的鉴定中药材的方法,从应用的现状不难看出DNA分子标记技术在该领域的应用已经取得了一些成绩。DNA分子标记技术作为中药材品质鉴定方法之一具有以下几点优势:微量、快速、特异性强、准确可靠,且不受药材生长发育阶段、供试部位、环境条件、产地、采收季节、贮藏等因素的影响,对样本要求较低,无论是药材还是成药、甚至是粉末都可以用来鉴别;归纳起来DNA分子标记技术已应用于几个方面:①用于中药真伪、近缘药材及代用品鉴别,使用的方法主要有RFLP,RAPD,AP-PCR,ITS等标记;②药材的野生类型与栽培品种的研究,使用的方法主要有RAPD,AFLP;③粉末、中成药鉴别,使用的方法主要有RAPD,RT-PCR;④本草考证与出土中药研究,使用的方法主要是测序技术;⑤道地药材研究,使用的方法主要有RAPD,RFLP ,AFLP标记和ITS与rRNA基因序列分析技术。文献报道的研究人员主要集中在中国、日本,但已显示了强劲的发展势头。另一方面,DNA分子标记技术在中药材鉴定中的应用也存在着明显的不足。主要表现在几个方面:①作为鉴别药材的方法学的研究,投入的人力物力都还很有限,与中药其他方面研究的结合还未开展,所以从方法学上来讲,中药材的分子鉴定方法还需要发展才是。②使用还很局限,由于分子标记技术对实验室硬件和从业人员的技术要求很高,再加上成本也较高,所以真正用于中药材鉴别的方法还很少,已涉及的中药品种也很有限,从文中可看出,仅RAPD、ISSR以及测序技术使用较多,涉及的中药品种也只有几十种;正因为技术复杂度的制约,此类鉴别技术对于生产收购第一线的人员仍然显得复杂,还无法推广使用。③数据分析所使用的软件还很局限,测序后对数据进行分析,这是判断药物近缘关系的关键步骤,数据分析必须借助多种软件及适当的方法,以往多采用的Nei(1972)方法现已显单一了,目前用于其他生物技术的分析软件早已多元化了,且很多新的软件主要应用于中药材的遗传多样性分析当中。④DNA分子标记技术对不同部位入药的药材仍然难以区分,各部具有同样DNA标记式样。对于成药、复方、提取液的DNA标记还未见报道。

3.2 展望从分子标记技术的发展来看,前后也就二十多年的时间,它也是随着分子生物学技术及信息技术的发展而发展的,不可否认的是分子标记技术肯定是本世纪的主流技术。除了以上分子标记技术外,现在还发展有单核苷酸多态性标记技术(SNP)、相关序列扩增多态性标记技术(SRAP)、靶位区域扩增多态性标记技术(TRAP)、荧光原位杂交技术(FISH)、变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)等[50],这些技术已被用于其它一些领域的研究之中,因此,作为方法学的研究,在中药鉴定领域还应该加大人力物力的投入,选择和发展出更适合中药鉴定或针对不同鉴定对象的鉴定方法,最终推动分子生物学技术对更多的中药品种或剂型进行鉴定。同时我们也看到,仅仅依靠分子标记技术在相当长的时期内还不可能解决中药材和中药制剂的鉴定和质量控制,那么我们就还必须要同时选择多种方法进行协同分析,比如分子标记技术与细胞学标记技术、生化标记技术、高效液相及核磁共振分析等技术的协同使用,通过多种技术的结合来达到最终准确鉴定中药材或中药复方制剂的目的。

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中药鉴定技术论文范文第14篇

【摘要】 目的对dna分子遗传标记技术在中药材鉴定领域的应用作一综述。方法通过查阅20世纪90年代以来发表的文献进行归纳分析。结果dna分子遗传标记技术具有微量、快速、特异性强、准确可靠、对样本要求较低的特点;使用较多的方法主要有rapd、issr、its标记以及rrna基因序列分析技术。同时,dna分子标记技术也存在着使用局限、对实验硬件和从业人员的技术要求高、成本较高、技术复杂度高、对不同部位入药的药材仍然难以区分以及无法用于成药、复方、提取液鉴定等弱点。结论dna分子遗传标记作为中药材鉴定的方法还有待发展和完善。

【关键词】 dna分子遗传标记; 中药材; 鉴定

abstract:objectivethe paper summarizes the researches of application of dna molecular markers in chinese medicinal materia.methodsinduction and analysis were used by referring to literature released since 1990s . resultsdna marker technologies have characteristics of trace,rapid,peculiarity, accuracy and credibility, lower requirements for the sample. random amplified polymorphic dna (rapd),inter-simple sequence repeat (issr), interial transcribed spaoers (its) and rrna gene sequencing technology are often used.however, dna marker technologies have some disadvantages that employees are required special skills,the cost is high and the technique is complicated,while it is difficult to distinguish different parts of chinese medicinal materia used medicinally and identify patent medicine, chinese medicine complex prescription and the extract of chinese medicinal materia. conclusionthe methods of chinese medicinal materia identification by dna molecular markers need to develop and improve.

key words:dna molecular marker; chinese medicinal materials; identification

针对我国药材种类繁多,来源复杂且品种混淆情况严重的状况, 为了保证临床用药的安全及质量和疗效,广大中医药领域的专家学者多年来一直都致力于寻找更加科学的鉴定方法来解决这一难题。WWw.133229.COM随着当今生命科学不断取得重大突破, 其中分子生物学技术以其准确性高、重复性好等特点尤为引人瞩目。dna分子标记大致可分3类:首先是以电泳技术和分子杂交技术为核心的分子标记技术,其中代表技术有rflp分子标记技术;第2类是以电泳技术和pcr技术为核心的分子标记技术,实际使用较多的代表技术为:rapd、简单序列重复间区标记技术(inter-simple sequence repeat issr)和aflp(amplified restriction fragment polymorphism)。第3类是以dna序列为核心的分子标记技术,其代表性技术有its(interial transcribed spaoers)测序分析技术。本文仅就最近十几年来dna分子标记技术在中药鉴定方面的应用作一分析, 并就其应用前景进行讨论和展望。

1 经典的dna分子标记技术

此类技术的代表是限制性片断长度多态性 (restriction fragment length polymorphism,rflp)。

rflp是最早发展的分子标记,是由bostein首先提出,soller和beckman最先应用于品种鉴别和品系纯度的测定,这是最早发展的分子标记技术。其基本原理是利用限制性内切酶酶切不同个体基因组dna后,与同位素或非同位素探针标记杂交,从而显示与探针含同源顺序的酶切片段在长度上的差异。rflp探针的来源主要是rg克隆和cdna克隆,其中cdna探针保守性较强,许多同科物种cdna探针都可以作为通用探针。在实际应用过程中,人们普遍感到经典的rflp技术须经酶切、电泳、southern转移、与探针杂交、放射自显影等步骤, 在实际应用中很不方便,费时费力,并受到探针来源的限制,多态性检出效率低(只能检测探针长度内切酶识别位点上的变异)。同时要求的dna量较大,实验材料必须新鲜, 因此难以适用于干燥药材的鉴定,目前在中药鉴定领域已很少使用,已归为被淘汰的技术。

在多源性中药材如伞形科北沙参、柴胡,菊科苍术属豆科甘草属,羽扇豆属(lupinus sp.),yamazaki m,茄科澳茄属(duborsia s ) mizukami h,3种苍术mizukami h的基原鉴定、资源分析及其地理品系(居群)间亲缘关系研究方面有了一些报道。

2 基于pcr的dna分子标记技术

此类标记技术的代表为:rapd(random amplified polymorphic dna)、简单序列重复间区标记技术(inter-simple sequence repeat issr)和aflp(amplified restriction fragment polymorphism)。

2.1 随机扩增片段长度多态性标记(random amplified polymorphic dna,rapd)rapd技术是由美国的williams与welsh两个研究小组于1990年同时提出的一种dna分子标记技术。williams等称之为rapd,welsh等称之为ap-pcr(arbitarily primed pcr),此技术利用单一的10个碱基寡核苷酸作为引物,对基因组dna进行pcr扩增,经琼脂糖凝胶电泳来检测dna序列多态性。rapd标记只需微量dna,且对受试基因组无特定要求(不须知道受试基因dna的背景材料),检测灵敏、方便、多态性强,可以检测出rflp标记不能检测的重复顺序,可填补rflp图谱空缺,适用于种质资源的鉴定和分类、目标性状基因分子标记、遗传图谱的快速构建等研究,也可用于亲缘关系等的研究。相对于其他几种分子标记, rapd标记是在中药鉴定领域用得最多的分子遗传标记技术, 并对中药鉴定研究产生了深刻的影响。rapd技术自问世以来 ,在中药鉴定中主要用于中药混淆品、代用品的鉴定,多来源中药的鉴定,名贵中药的鉴定,动物类中药的鉴定等。

从1996年以来,黄璐琦等[1~3]等分别对天花粉、西洋参等进行了鉴别研究,证明了rapd分析法作为鉴别动植物类生药是可行的。

2000~2004年,于燕莉等[4~13]分别对金银花、姜黄属药材和山药、射干类药材射干及混淆品鸢尾、野鸢尾、蝴蝶花、德国鸢尾、近缘物种金线莲母(金线莲) 与金线莲公(无线金线莲)、泽泻、麻黄、灵芝、厚朴、地黄和海风藤等进行了研究,从分子水平定性地揭示道地药材的遗传变异,得出同种异地药材所形成的不同的居群,具有不同的遗传特征。李颖等[14]分别对广藿香和独活药材进行探索, 并建立了鉴别方法。

2.2 aflp技术扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism, aflp)标记技术是1993年由荷兰科学家zabeau和vos发展起来的一种检测dna多态性的方法, aflp是一种rflp与rapd相结合而又不使用分子杂交技术的分子标记手段,被誉为新一代的分子标记技术。它的原理是基于对基因组dna双酶切经pcr扩增后的限制片段进行选择。使用特定的双链接头与酶切dna片段连接作为扩增反应的模板,用含有选择性碱基的引物对模板dna进行扩增,选择性碱基的种类、数目和顺序决定了扩增片段的特殊性,所以,只有那些限制性位点侧翼的核苷酸与引物的选择性碱基相匹配的限制性片段才可以被扩增。扩增产物经放射性同位素标记、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,然后根据凝胶上的dna指纹的有无来检出多态性。由于aflp预先不需要知道dna序列的情况,但获得的指纹信息位点要比rapd技术更为丰富。相比之下。最后完成aflp实验的成本比用rapd方法的成本低,更省时间、更方便,而且准确性更高,数据更可靠,技术难度也不大。

2000年以来,马小军等[15~19]用aflp标记分别对人参、西洋参、石斛以及天麻等进行分析,结果显示,aflp指纹技术具有稳定性高、重复性好等优点,得到了清晰的aflp指纹图谱,该体系具有良好的稳定性和重复性。

2.3 issr标记技术简单序列重复区间(inter-simple sequence repeat,issr)技术又称为锚定简单序列重复技术(anchored simple sequence repeat,assr)由加拿大蒙特利尔大学的zietkiewicz等于1994年提出。它用锚定的微卫星dna为引物,即在ssr序列的3’端或5’端加上2~4个随机核苷酸,在pcr中,锚定引物可以引起特定位点退火,导致与锚定引物互补的间隔不太大的重复序列间dna片段进行pcr扩增。所扩增interssr区域的多个条带通过聚丙烯酰胺凝胶电泳或者琼脂糖凝胶电泳得以分辨,扩增带多为显性表。issr标记技术特点:实验操作简单、快速、高效,不需要繁琐地构建基因文库、杂交和同位素显示等步骤。issr标记技术结合了rapd标记技术和ssr标记技术的优点,耗资少,模板dna用量也少。

2003年以来,此标记技术受到许多学者的青睐,邱英雄等[20~31]分别对明党参和川明参、南北五味子、罗汉果、金花茶、怀区地黄、铁皮石斛和黄精、麦冬、金钗石斛、丹参和半夏等药材的基因组dna进行pcr扩增,建立并优化了issr-pcr反应体系,结果证明issr标记可以作为不同产地药材鉴别的有效分子标记。

此外,2008年以来,李磊等[32~36]分别对4种叶型性状半夏和掌叶半夏、山茱萸、银杏、益智和乌头等药材利用issr分子标记进行了分析,并取得良好结果。

2.4 dna序列分析技术以dna序列为核心的分子标记技术。建立在pcr技术基础之上的dna测序分析技术(dna sequencing)的开发使dna分子标记技术取得了又一次的突破性进展。

动植物在进化过程中,其基因会发生碱基的重排、替代等,从而导致基因序列的差异。通过检测其dna片段序列的差异,即可将不同的种区别开来。近年来,由于dna测序技术的发展以及人们对一些基因结构、功能的进化规律认识的更加深入,一些基因已用于动植物的进化与分类、物种鉴别研究。利用已知基因的结构、序列,可以为pcr引物的设计及目的基因的扩增提供前提条件。而基于pcr的dna直接测序技术,极大地提高了dna序列分析的效率,促进了该项技术的应用研究。目前用于中药dna测序的基因主要有植物叶绿体基因组的rbcl,mat k rpoc 等;植物核基因组的rrna、its等;动物线粒体基因组cytb基因等 ,这些被选基因的共同特点是进化速率差异大,基因序列变异大,基因序列均匀地分布于整个基因组,分辨率高,一般用于种级以上的分类系统研究以及分析研究动植物的亲缘关系与进化等。

马小军等[37~40]2005年分别通过测定山参、大戟、巴戟天以及细辛和柴胡的序列,获得了可喜的效果 。

此外,徐红等[41~47]2004年分别对川芎、西洋参、竹节参、石斛、姜黄、大黄、当归及小秦艽、肉苁蓉、广藿香、太子参、葛根等进行了药材鉴别,根据序列能够将研究对象区别开。

动物类药材多用线粒体细胞色素b基因片段的序列变异鉴别药材。1998年吴平[48]通过分析对乌龟、中华鳖和山瑞鳖线粒体12s rrna基因片段序列来区分正品和混淆品;还通过扩增约450bp的12s rrna和约490 bp的cytb基因片段对海马作了dna序列分析,可作为其它动物药材干样品鉴定的参考。1999年王义权等[49]扩增了乌梢蛇及其混淆品的cytb基因片段,通过比较蛇的cytb基因246 bp的同源dna序列,可以准确区分乌梢蛇及其混淆品。

3 评价与展望

3.1 评价中药材品质鉴定是中药质量控制的首要环节,多年来人们一直在寻找科学有效的鉴定中药材的方法,从应用的现状不难看出dna分子标记技术在该领域的应用已经取得了一些成绩。dna分子标记技术作为中药材品质鉴定方法之一具有以下几点优势:微量、快速、特异性强、准确可靠,且不受药材生长发育阶段、供试部位、环境条件、产地、采收季节、贮藏等因素的影响,对样本要求较低,无论是药材还是成药、甚至是粉末都可以用来鉴别;归纳起来dna分子标记技术已应用于几个方面:①用于中药真伪、近缘药材及代用品鉴别,使用的方法主要有rflp,rapd,ap-pcr,its等标记;②药材的野生类型与栽培品种的研究,使用的方法主要有rapd,aflp;③粉末、中成药鉴别,使用的方法主要有rapd,rt-pcr;④本草考证与出土中药研究,使用的方法主要是测序技术;⑤道地药材研究,使用的方法主要有rapd,rflp ,aflp标记和its与rrna基因序列分析技术。文献报道的研究人员主要集中在中国、日本,但已显示了强劲的发展势头。另一方面,dna分子标记技术在中药材鉴定中的应用也存在着明显的不足。主要表现在几个方面:①作为鉴别药材的方法学的研究,投入的人力物力都还很有限,与中药其他方面研究的结合还未开展,所以从方法学上来讲,中药材的分子鉴定方法还需要发展才是。②使用还很局限,由于分子标记技术对实验室硬件和从业人员的技术要求很高,再加上成本也较高,所以真正用于中药材鉴别的方法还很少,已涉及的中药品种也很有限,从文中可看出,仅rapd、issr以及测序技术使用较多,涉及的中药品种也只有几十种;正因为技术复杂度的制约,此类鉴别技术对于生产收购第一线的人员仍然显得复杂,还无法推广使用。③数据分析所使用的软件还很局限,测序后对数据进行分析,这是判断药物近缘关系的关键步骤,数据分析必须借助多种软件及适当的方法,以往多采用的nei(1972)方法现已显单一了,目前用于其他生物技术的分析软件早已多元化了,且很多新的软件主要应用于中药材的遗传多样性分析当中。④dna分子标记技术对不同部位入药的药材仍然难以区分,各部具有同样dna标记式样。对于成药、复方、提取液的dna标记还未见报道。

3.2 展望从分子标记技术的发展来看,前后也就二十多年的时间,它也是随着分子生物学技术及信息技术的发展而发展的,不可否认的是分子标记技术肯定是本世纪的主流技术。除了以上分子标记技术外,现在还发展有单核苷酸多态性标记技术(snp)、相关序列扩增多态性标记技术(srap)、靶位区域扩增多态性标记技术(trap)、荧光原位杂交技术(fish)、变性梯度凝胶电泳技术(dgge)等[50],这些技术已被用于其它一些领域的研究之中,因此,作为方法学的研究,在中药鉴定领域还应该加大人力物力的投入,选择和发展出更适合中药鉴定或针对不同鉴定对象的鉴定方法,最终推动分子生物学技术对更多的中药品种或剂型进行鉴定。同时我们也看到,仅仅依靠分子标记技术在相当长的时期内还不可能解决中药材和中药制剂的鉴定和质量控制,那么我们就还必须要同时选择多种方法进行协同分析,比如分子标记技术与细胞学标记技术、生化标记技术、高效液相及核磁共振分析等技术的协同使用,通过多种技术的结合来达到最终准确鉴定中药材或中药复方制剂的目的。

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[48]吴 平,周开亚,徐璐珊,等.中药材龟甲的分子鉴定研究[j].药学学报,1998,33(4):304.

中药鉴定技术论文范文第15篇

【摘要】  目的对dna分子遗传标记技术在中药材鉴定领域的应用作一综述。方法通过查阅20世纪90年代以来发表的文献进行归纳分析。结果dna分子遗传标记技术具有微量、快速、特异性强、准确可靠、对样本要求较低的特点;使用较多的方法主要有rapd、issr、its标记以及rrna基因序列分析技术。同时,dna分子标记技术也存在着使用局限、对实验硬件和从业人员的技术要求高、成本较高、技术复杂度高、对不同部位入药的药材仍然难以区分以及无法用于成药、复方、提取液鉴定等弱点。结论dna分子遗传标记作为中药材鉴定的方法还有待发展和完善。

【关键词】  dna分子遗传标记; 中药材; 鉴定

abstract:objectivethe paper summarizes the researches of application of dna molecular markers in chinese medicinal materia.methodsinduction and analysis were used by referring to literature released since 1990s . resultsdna marker technologies have characteristics of trace,rapid,peculiarity, accuracy and credibility, lower requirements for the sample. random amplified polymorphic dna (rapd),inter-simple sequence repeat (issr), interial transcribed spaoers (its) and  rrna gene sequencing technology are often used.however, dna marker technologies have some disadvantages that employees are required special skills,the cost is high and the technique is complicated,while it is difficult to distinguish different parts of chinese medicinal materia used medicinally and identify patent medicine, chinese medicine complex prescription and the extract of chinese medicinal materia. conclusionthe methods of chinese medicinal materia identification by dna molecular markers need to develop and improve.

key words:dna molecular marker;  chinese medicinal materials;  identification

   

针对我国药材种类繁多,来源复杂且品种混淆情况严重的状况, 为了保证临床用药的安全及质量和疗效,广大中医药领域的专家学者多年来一直都致力于寻找更加科学的鉴定方法来解决这一难题。随着当今生命科学不断取得重大突破, 其中分子生物学技术以其准确性高、重复性好等特点尤为引人瞩目。dna分子标记大致可分3类:首先是以电泳技术和分子杂交技术为核心的分子标记技术,其中代表技术有rflp分子标记技术;第2类是以电泳技术和pcr技术为核心的分子标记技术,实际使用较多的代表技术为:rapd、简单序列重复间区标记技术(inter-simple sequence repeat issr)和aflp(amplified restriction fragment polymorphism)。第3类是以dna序列为核心的分子标记技术,其代表性技术有its(interial transcribed spaoers)测序分析技术。本文仅就最近十几年来dna分子标记技术在中药鉴定方面的应用作一分析, 并就其应用前景进行讨论和展望。

1  经典的dna分子标记技术

   

此类技术的代表是限制性片断长度多态性 (restriction fragment length polymorphism,rflp)。

   

rflp是最早发展的分子标记,是由bostein首先提出,soller和beckman最先应用于品种鉴别和品系纯度的测定,这是最早发展的分子标记技术。其基本原理是利用限制性内切酶酶切不同个体基因组dna后,与同位素或非同位素探针标记杂交,从而显示与探针含同源顺序的酶切片段在长度上的差异。rflp探针的来源主要是rg克隆和cdna克隆,其中cdna探针保守性较强,许多同科物种cdna探针都可以作为通用探针。在实际应用过程中,人们普遍感到经典的rflp技术须经酶切、电泳、southern转移、与探针杂交、放射自显影等步骤, 在实际应用中很不方便,费时费力,并受到探针来源的限制,多态性检出效率低(只能检测探针长度内切酶识别位点上的变异)。同时要求的dna量较大,实验材料必须新鲜, 因此难以适用于干燥药材的鉴定,目前在中药鉴定领域已很少使用,已归为被淘汰的技术。

   

在多源性中药材如伞形科北沙参、柴胡,菊科苍术属豆科甘草属,羽扇豆属(lupinus sp.),yamazaki m,茄科澳茄属(duborsia s ) mizukami h,3种苍术mizukami h的基原鉴定、资源分析及其地理品系(居群)间亲缘关系研究方面有了一些报道。

2  基于pcr的dna分子标记技术

   

此类标记技术的代表为:rapd(random amplified polymorphic dna)、简单序列重复间区标记技术(inter-simple sequence repeat issr)和aflp(amplified restriction fragment polymorphism)。

2.1  随机扩增片段长度多态性标记(random amplified polymorphic dna,rapd)rapd技术是由美国的williams与welsh两个研究小组于1990年同时提出的一种dna分子标记技术。williams等称之为rapd,welsh等称之为ap-pcr(arbitarily primed pcr),此技术利用单一的10个碱基寡核苷酸作为引物,对基因组dna进行pcr扩增,经琼脂糖凝胶电泳来检测dna序列多态性。rapd标记只需微量dna,且对受试基因组无特定要求(不须知道受试基因dna的背景材料),检测灵敏、方便、多态性强,可以检测出rflp标记不能检测的重复顺序,可填补rflp图谱空缺,适用于种质资源的鉴定和分类、目标性状基因分子标记、遗传图谱的快速构建等研究,也可用于亲缘关系等的研究。相对于其他几种分子标记, rapd标记是在中药鉴定领域用得最多的分子遗传标记技术, 并对中药鉴定研究产生了深刻的影响。rapd技术自问世以来 ,在中药鉴定中主要用于中药混淆品、代用品的鉴定,多来源中药的鉴定,名贵中药的鉴定,动物类中药的鉴定等。

   

从1996年以来,黄璐琦等[1~3]等分别对天花粉、西洋参等进行了鉴别研究,证明了rapd分析法作为鉴别动植物类生药是可行的。

   

2000~2004年,于燕莉等[4~13]分别对金银花、姜黄属药材和山药、射干类药材射干及混淆品鸢尾、野鸢尾、蝴蝶花、德国鸢尾、近缘物种金线莲母(金线莲) 与金线莲公(无线金线莲)、泽泻、麻黄、灵芝、厚朴、地黄和海风藤等进行了研究,从分子水平定性地揭示道地药材的遗传变异,得出同种异地药材所形成的不同的居群,具有不同的遗传特征。李颖等[14]分别对广藿香和独活药材进行探索, 并建立了鉴别方法。

2.2  aflp技术扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism, aflp)标记技术是1993年由荷兰科学家zabeau和vos发展起来的一种检测dna多态性的方法, aflp是一种rflp与rapd相结合而又不使用分子杂交技术的分子标记手段,被誉为新一代的分子标记技术。它的原理是基于对基因组dna双酶切经pcr扩增后的限制片段进行选择。使用特定的双链接头与酶切dna片段连接作为扩增反应的模板,用含有选择性碱基的引物对模板dna进行扩增,选择性碱基的种类、数目和顺序决定了扩增片段的特殊性,所以,只有那些限制性位点侧翼的核苷酸与引物的选择性碱基相匹配的限制性片段才可以被扩增。扩增产物经放射性同位素标记、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,然后根据凝胶上的dna指纹的有无来检出多态性。由于aflp预先不需要知道dna序列的情况,但获得的指纹信息位点要比rapd技术更为丰富。相比之下。最后完成aflp实验的成本比用rapd方法的成本低,更省时间、更方便,而且准确性更高,数据更可靠,技术难度也不大。

   

2000年以来,马小军等[15~19]用aflp标记分别对人参、西洋参、石斛以及天麻等进行分析,结果显示,aflp指纹技术具有稳定性高、重复性好等优点,得到了清晰的aflp指纹图谱,该体系具有良好的稳定性和重复性。

2.3  issr标记技术简单序列重复区间(inter-simple sequence repeat,issr)技术又称为锚定简单序列重复技术(anchored simple sequence repeat,assr)由加拿大蒙特利尔大学的zietkiewicz等于1994年提出。它用锚定的微卫星dna为引物,即在ssr序列的3’端或5’端加上2~4个随机核苷酸,在pcr中,锚定引物可以引起特定位点退火,导致与锚定引物互补的间隔不太大的重复序列间dna片段进行pcr扩增。所扩增interssr区域的多个条带通过聚丙烯酰胺凝胶电泳或者琼脂糖凝胶电泳得以分辨,扩增带多为显性表。issr标记技术特点:实验操作简单、快速、高效,不需要繁琐地构建基因文库、杂交和同位素显示等步骤。issr标记技术结合了rapd标记技术和ssr标记技术的优点,耗资少,模板dna用量也少。

   

2003年以来,此标记技术受到许多学者的青睐,邱英雄等[20~31]分别对明党参和川明参、南北五味子、罗汉果、金花茶、怀区地黄、铁皮石斛和黄精、麦冬、金钗石斛、丹参和半夏等药材的基因组dna进行pcr扩增,建立并优化了issr-pcr反应体系,结果证明issr标记可以作为不同产地药材鉴别的有效分子标记。

   

此外,2008年以来,李磊等[32~36]分别对4种叶型性状半夏和掌叶半夏、山茱萸、银杏、益智和乌头等药材利用issr分子标记进行了分析,并取得良好结果。

2.4  dna序列分析技术以dna序列为核心的分子标记技术。建立在pcr技术基础之上的dna测序分析技术(dna sequencing)的开发使dna分子标记技术取得了又一次的突破性进展。

   

动植物在进化过程中,其基因会发生碱基的重排、替代等,从而导致基因序列的差异。通过检测其dna片段序列的差异,即可将不同的种区别开来。近年来,由于dna测序技术的发展以及人们对一些基因结构、功能的进化规律认识的更加深入,一些基因已用于动植物的进化与分类、物种鉴别研究。利用已知基因的结构、序列,可以为pcr引物的设计及目的基因的扩增提供前提条件。而基于pcr的dna直接测序技术,极大地提高了dna序列分析的效率,促进了该项技术的应用研究。目前用于中药dna测序的基因主要有植物叶绿体基因组的rbcl,mat k rpoc 等;植物核基因组的rrna、its等;动物线粒体基因组cytb基因等 ,这些被选基因的共同特点是进化速率差异大,基因序列变异大,基因序列均匀地分布于整个基因组,分辨率高,一般用于种级以上的分类系统研究以及分析研究动植物的亲缘关系与进化等。

   

马小军等[37~40]2005年分别通过测定山参、大戟、巴戟天以及细辛和柴胡的序列,获得了可喜的效果 。

   

此外,徐红等[41~47]2004年分别对川芎、西洋参、竹节参、石斛、姜黄、大黄、当归及小秦艽、肉苁蓉、广藿香、太子参、葛根等进行了药材鉴别,根据序列能够将研究对象区别开。

   

动物类药材多用线粒体细胞色素b基因片段的序列变异鉴别药材。1998年吴平[48]通过分析对乌龟、中华鳖和山瑞鳖线粒体12s rrna基因片段序列来区分正品和混淆品;还通过扩增约450bp的12s rrna和约490 bp的cytb基因片段对海马作了dna序列分析,可作为其它动物药材干样品鉴定的参考。1999年王义权等[49]扩增了乌梢蛇及其混淆品的cytb基因片段,通过比较蛇的cytb基因246 bp的同源dna序列,可以准确区分乌梢蛇及其混淆品。

3   评价与展望

3.1  评价中药材品质鉴定是中药质量控制的首要环节,多年来人们一直在寻找科学有效的鉴定中药材的方法,从应用的现状不难看出dna分子标记技术在该领域的应用已经取得了一些成绩。dna分子标记技术作为中药材品质鉴定方法之一具有以下几点优势:微量、快速、特异性强、准确可靠,且不受药材生长发育阶段、供试部位、环境条件、产地、采收季节、贮藏等因素的影响,对样本要求较低,无论是药材还是成药、甚至是粉末都可以用来鉴别;归纳起来dna分子标记技术已应用于几个方面:①用于中药真伪、近缘药材及代用品鉴别,使用的方法主要有rflp,rapd,ap-pcr,its等标记;②药材的野生类型与栽培品种的研究,使用的方法主要有rapd,aflp;③粉末、中成药鉴别,使用的方法主要有rapd,rt-pcr;④本草考证与出土中药研究,使用的方法主要是测序技术;⑤道地药材研究,使用的方法主要有rapd,rflp ,aflp标记和its与rrna基因序列分析技术。文献报道的研究人员主要集中在中国、日本,但已显示了强劲的发展势头。另一方面,dna分子标记技术在中药材鉴定中的应用也存在着明显的不足。主要表现在几个方面:①作为鉴别药材的方法学的研究,投入的人力物力都还很有限,与中药其他方面研究的结合还未开展,所以从方法学上来讲,中药材的分子鉴定方法还需要发展才是。②使用还很局限,由于分子标记技术对实验室硬件和从业人员的技术要求很高,再加上成本也较高,所以真正用于中药材鉴别的方法还很少,已涉及的中药品种也很有限,从文中可看出,仅rapd、issr以及测序技术使用较多,涉及的中药品种也只有几十种;正因为技术复杂度的制约,此类鉴别技术对于生产收购第一线的人员仍然显得复杂,还无法推广使用。③数据分析所使用的软件还很局限,测序后对数据进行分析,这是判断药物近缘关系的关键步骤,数据分析必须借助多种软件及适当的方法,以往多采用的nei(1972)方法现已显单一了,目前用于其他生物技术的分析软件早已多元化了,且很多新的软件主要应用于中药材的遗传多样性分析当中。④dna分子标记技术对不同部位入药的药材仍然难以区分,各部具有同样dna标记式样。对于成药、复方、提取液的dna标记还未见报道。

3.2  展望从分子标记技术的发展来看,前后也就二十多年的时间,它也是随着分子生物学技术及信息技术的发展而发展的,不可否认的是分子标记技术肯定是本世纪的主流技术。除了以上分子标记技术外,现在还发展有单核苷酸多态性标记技术(snp)、相关序列扩增多态性标记技术(srap)、靶位区域扩增多态性标记技术(trap)、荧光原位杂交技术(fish)、变性梯度凝胶电泳技术(dgge)等[50],这些技术已被用于其它一些领域的研究之中,因此,作为方法学的研究,在中药鉴定领域还应该加大人力物力的投入,选择和发展出更适合中药鉴定或针对不同鉴定对象的鉴定方法,最终推动分子生物学技术对更多的中药品种或剂型进行鉴定。同时我们也看到,仅仅依靠分子标记技术在相当长的时期内还不可能解决中药材和中药制剂的鉴定和质量控制,那么我们就还必须要同时选择多种方法进行协同分析,比如分子标记技术与细胞学标记技术、生化标记技术、高效液相及核磁共振分析等技术的协同使用,通过多种技术的结合来达到最终准确鉴定中药材或中药复方制剂的目的。

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