饲料中阿魏酸酯酶乳酸菌的鉴定范文

摘要:本研究用平板法从热带牧草青贮饲料中筛选出两株阿魏酸酯酶活性较强的乳酸菌W16及H22，经过生理生化及16SrDNA序列同源性分析，这两株乳酸菌分别被鉴定为戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)及发酵乳杆菌(Lactobacillusfer-mentum)。

关键词:阿魏酸酯酶;乳酸菌;青贮饲料

纤维素酶常被作为青贮添加剂，以期降解植物细胞壁成分，为乳酸菌提供更多的可溶性糖发酵产酸，提高青贮品质，这点对可溶性糖含量低、纤维含量高的饲草来说至关重要。在植物细胞壁组织中，阿魏酸等酚酸类木质素分子以酯键方式与半纤维素分子间形成致密网状交联结构，在提高了植物组织木质化程度的同时，从空间上可以阻遏微生物所分泌的纤维素酶、木聚糖酶等对纤维素和半纤维素的有效酶解，阿魏酸酯酶可打开细胞壁中的酯键，有利于饲草细胞壁中纤维素和半纤维素的进一步酶解。大量研究证实，阿魏酸酯酶可以协同纤维素酶、木聚糖酶促进植物纤维组分的降解。主要应用在生物质转化领域;近年来，国外有研究将阿魏酸酯酶应用于青贮饲料添加，发现其对纤维消化率有显著促进作用［1］。

1材料与方法

1.1菌株筛选试验从热带牧草青贮饲料分离出乳酸菌56株。参考Donagy的方法［2］，灭菌不含葡萄糖成分的MRS琼脂，配制阿魏酸乙酯10%溶液，待MRS培养基温度降低至60℃左右时，按照1%的量加入阿魏酸乙酯溶液(阿魏酸乙酯终浓度1g/L)，混匀，此为筛选培养基，将乳酸菌接种到筛选平板上，30℃厌氧培养48h，观察平板上是否出现透明圈。

1.2菌株鉴定根据乳酸菌生理生化特性、API50碳源发酵结果以及16SrDNA序列分析对筛选菌株进行鉴定。

2结果与分析

2.1阿魏酸酯酶乳酸菌的筛选经过48h培养，56株乳酸菌中有7株在筛选平板上产生明显的透明圈(见表1)，其中两株编号为W16及H22的菌株产生的透明圈最大，直径达到8mm以上，表明这两株乳酸菌的阿魏酸酯酶活性最强。这两株乳酸菌都是革兰氏染色阳性、过氧化氢酶阴性。W16为球菌而H22为杆菌。如表2所示，两株菌都能在3.0%(W/V)的NaCl浓度下正常生长，甚至能够耐受6.5%(W/V)的NaCl浓度。W16可以耐受5℃低温，H22耐受50℃的高温。两株菌可以耐受的pH范围为3.5～9.0，W16在pH3.0的酸性环境中依然可以良好生长。将两株乳酸菌测得的16SrDNA序列递交到GenBank，使用程序Blast来找寻与其有最大同源性的序列，并与检测得到的标准菌株序列信息通过CLUSTALW软件比对。采用邻接法构建进化树，在分子进化树上，菌株W16和Pediococcuspentosaceus最接近，菌株H22和Lactoba-cillusfermentum序列相似性最高，结合生理生化试 验结果分析，W16被鉴定为Pediococcuspentosaceus，H22被鉴定为Lactobacillusfermentum。

3结论

本试验筛选到两株具有较强阿魏酸酯酶活性的乳酸菌菌株W16及H22，经生理生化及16S序列分析，W16被鉴定为Pediococcuspentosaceus，H22被鉴定为Lactobacillusfermentum。两株菌在青贮菌剂开发中具有潜在应用价值。

作者：李东霞 郑玉龙 张颖超 林炎丽 杨富裕 单位：中国农业大学动物科技学院