HCV核心抗原的化学检测在肝炎中的应用范文

摘要：应用化学发光法（chemiluminescentimmunoassay，CLIA）检测来自住院及门诊220例样本的HCV－cAg、HCV－Ab，并对其进行HCV－RNA定量分析，以了解HCV－cAg在HCV诊断中的应用价值。结果表明，第一组75例高危人群筛查样本中HCV－Ab有15例阳性（20％），HCV－cAg6例阳性（8．0％），HCV－RNA7例阳性（9．3％）。第二组70例确诊组样本中HCV－Ab66例阳性（94．3％）、HCV－cAg62例阳性（88．6％）、HCV－RNA60例阳性（85．7％）。第三组75例健康人群的筛查样本中HCV－Ab5例阳性（6．7％）、HCV－cAg2例阳性（2．7％）、HCV－RNA无阳性病例。HCV－Ab和HCV－cAg联合检测阳性率与HCV－RNA比较差异有统计学意义（P＜0．05）。在筛查HCV感染时，CLIA法检测HCV－cAg的检出时间早于HCV－Ab，HCV－cAg与HCV－Ab联合检测对术前患者HCV筛查更具有临床价值。

关键词：化学发光法；丙型肝炎病毒；HCV－cAg；HCV－Ab

HCV已呈全球性流行。据世界卫生组织统计，全球HCV的感染率约为3％，估计约1．7亿人感染HCV，每年新发病例约3．5万例［1］。在我国，病毒性肝炎的发病患者数始终位于所有传染病的前列，而HCV的发病率在病毒性肝炎中呈现逐年上升趋势。在目前还没有疫苗的情况下，早期发现、早期治疗至关重要。化学发光法（chemilumi－nescentimmunoassay，CLIA）检测HCV－cAg可将窗口期缩短至35．8d，并且抗原量与RNA水平呈平行变化趋势。CLIA检测HCV－cAg采用全自动预处理步骤裂解病毒颗粒，并结合抗原抗体复合物，消除检测HCV－cAg时HCV－Ab的干扰。HCV－cAg检测能对HCV感染进行诊断并能监测感染者的病情变化。本文对本院住院输血和手术前及门诊的患者，以及市疾控中心患者共计220份样本，进行HCV－cAg、HCV－Ab和HCV－RNA检测，以了解HCV－cAg试剂在筛查HCV感染时的有效性。

1对象与方法

1．1研究对象

研究对象为2016年1月至2018年2月来我院就诊、体检的人员，将其分为3组：第一组HCV高危人群组（75例）为根据《中华人民共和国卫生行业标准———丙型病毒性肝炎筛查及管理》中对于高危筛查人群的要求进行收集，标本采集于市疾控中心就诊检测人员、市看守所聚众吸毒人员、我院初诊检测HCV的患者、ALT＞80U／L伴胆红素升高患者以及手术前（含输血前）做例行检查的患者。第二组HCV确诊组（70例）为总院感染科HCV确证患者、总院肾脏内科HCV确证患者、某市疾控中心确证患者。符合下列任何一项即可诊断为临床感染HCV病例：（1）符合血清HCV－Ab阳性和流行病学史；（2）符合血清HCV－Ab阳性和临床表现；（3）符合血清HCV－Ab阳性和血清ALT、AST升高。纳入标准：（1）年龄1～78岁，性别不限；（2）符合HCV的诊断标准。排除标准：肝硬化、重叠HBV感染、自身免疫性肝炎。第三组阴性对照组（75例）为同期体检的健康人。对3组分别进行HCV－Ab、HCV－cAg、HCV－RNA检测。

1．2方法

采用分离胶专用试管抽取患者静脉血3mL，离心取血清，并放置在－70℃冰箱中保存。（1）HCV－cAg检测：采用HCV－cAg微粒子CLIA检测试剂盒进行HCV－cAg检测，试剂盒由美国雅培公司提供。（2）HCV－Ab检测：采用HCV－Ab微粒子CLIA检测试剂盒进行HCV－Ab检测，试剂由美国雅培公司提供。（3）HCV－RNA检测：采用RT－PCR，测定范围在103～107拷贝／mL，HCV－RNA阴性判定标准：小于103拷贝／mL。HCV－RNA检测试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供。

1．3统计学处理

采用SPSS17．0进行数据处理分析，数据均以百分率（％）表示，用χ2检验比较差异，用kappa检验检测结果的一致性。以P＜0．05为差异有统计学意义。

2结果

2．13组样本HCV－Ab、HCV－cAg、HCV－RNA检测结果

结果见表1。高危组中HCV－cAg与HCV－RNA阳性率结果相一致，分别为8．0％和9．3％。确诊组中HCV－cAg与HCV－RNA的阳性率结果分别为88．6％和85．7％，其中HCV－Ab的阳性率达到94．3％。阴性对照组中，HCV－Ab检测阳性率高于HCV－cAg，分别为6．7％和2．7％。总体上HCV－Ab的阳性检出率高于HCV－cAg。

2．2高危组75例样本HCV－Ab、HCV－cAg和HCV－RNA检测结果

以HCV－RNA为金标准，将不同组合模式下的HCV－Ab＋HCV－cAg与HCV－RNA进行相关性分析。分析结果表明，HCV－Ab（＋）＋HCV－cAg（＋）组检测的阳性率为66．7％，高于HCV－Ab（＋）＋HCV－cAg（－）组的20．0％，说明HCV－Ab和HCV－cAg联合检测有助于提高HCV的阳性筛查率，减少假阳性的产生（P＜0．05，表2）。

2．3确诊组样本HCV－Ab、HCV－cAg和HCV－RNA检测结果

以HCV－RNA为标准，对确诊组的70例样本进行检测，最后确诊60例样本为HCV－RNA阳性，10例为阴性。将不同组合模式下的HCV－Ab＋HCV－cAg与HCV－RNA进行相关性分析。分析结果显示，HCV－Ab（＋）＋HCV－cAg（＋）组检测结果阳性率为96．4％，分别高于HCV－Ab（＋）＋HCV－cAg（－）组合下的86．4％、HCV－Ab（－）＋HCV－cAg（＋）组合下的87．5％。以上结果表明HCV－Ab联合HCV－cAg能提高检测的阳性率（P＜0．05，表3）。

3讨论

目前血清HCV－RNA检测已成为诊断HCV感染的“金标准”，其定量分析法的特异度为（98～99）％，高敏感度的病毒核酸扩增技术甚至可以在HCV感染后6d内检测到HCV－RNA。病毒核酸扩增技术准确敏感，但试剂成本较高、操作繁琐、实验室各项条件要求极高，影响了此方法在HCV常规筛查中的应用。检测HCV感染最初推荐用HCV－Ab指标。在临床上，对大部分肝脏疾病患者而言，筛查检测的灵敏度和特异度均较高，HCV－Ab假阳性情况较为少见。然而，在HCV感染率低的人群中（如无偿献血者、现役或退役军人、普通人群、卫生保健从业人员、性病门诊就诊者），假阳性率较高，阳性预测值较低［2］。HCV－Ab产生假阳性的主要原因有：高IgG血症、RF干扰、超氧化物歧化酶干扰、用于试剂制备的HCV－cAg不纯［2］。由于以上原因，不能仅仅依靠筛查实验阳性反应结果来诊断一个人是否患HCV。因此，研究者需要应用具有更高特异度的补充实验进行确证筛查。HCV－cAg作为一种新的HCV感染诊断指标，可用于献血人员的筛查，且因其检测时间段为感染后14～70d，窗口期比HCV－Ab短，可明显增强输血安全，亦能监测抗病毒治疗疗效。因此HCV－cAg的检测对HCV的早期感染以及免疫功能紊乱和一些不产生HCV－Ab的患者很有价值［3］。HCV－cAg对HCV－Ab有一定的补充作用，但由于HCV－cAg的检测灵敏度较低，在HCV的筛查中尚不能取代HCV－Ab的作用，只能作为补充，联合检测HCV－cAg与HCV－Ab可以提高HCV的筛查率［4］。有资料显示，伴随病毒血症的发生，大多数HCV感染者血清中可检测到HCV－cAg，其滴度和RNA水平明显相关，在血清中的含量也可作为病程进展的指示，或抗体阳性慢性患者抗病毒治疗的监控指标［5－6］。现行的常用筛检方法有ELISA，它具有简便、快速、灵敏度及特异度较好的特点，但对灰区结果判读的可靠性通常较差［7］。CLIA的优势主要体现在具有发光反应的高灵敏度［8］，具有免疫反应的特异度［9］。与ELISA法比较，该方法优点在于全自动化分析，省时以及可重复率高，定量最小值可达皮克级［10］。荧光定量PCR法检测HCV－RNA可反映患者体内病毒复制情况，是HCV感染的确证实验。它检测的窗口期短，约为14d［11］，但受到实验操作繁琐、价格昂贵等诸多因素的影响，难以在常规实验室或基层医院应用推广和普及［12］。本实验采用微粒子CLIA，定量检测人血清或血浆中HCV－cAg含量，能够诊断HCV感染及监测患者病情，并且该操作实现全面自动化，整个过程在雅培Architecti2000进行，大大减少了对实验者的操作要求，也提高了检测的精密度。HCV－cAg在血液中比HCV－Ab出现早，HCV感染后，检测HCV－Ab窗口期长达70余天，因此在感染早期，HCV－Ab阴性不能排除HCV感染；急、慢性活动性HCV感染的标志是HCV－cAg的存在，类似于HbsAg在活动性HBV感染中的诊断意义。通过对3组共220例样本进行HCV诊断，结果表明HCV－Ab检测的阳性率高于HCV－cAg和HCV－RNA，HCV－cAg阳性率与HCV－RNA阳性率结果一致，差异无统计学意义。以HCV－RNA检测为金标准，通过对高危组和确诊组进一步分析，HCV－Ab和HCV－cAg联合检测阳性率显著高于单独HCV－Ab检测。由于CLIA法检测HCV－cAg能缩短HCV病毒感染的窗口期，并且抗原量与RNA水平呈平行变化趋势，因此通过CLIA法将HCV－Ab和HCV－cAg两者有效联合诊断能够提高HCV检出率和诊断可靠性。

参考文献

［1］李婷婷，殷森，黎诚耀．丙型肝炎疫苗最新研究进展———挑战与希望并存［J］．现代免疫学，2015，35（1）：81－87．

［2］陈新月，任姗．《丙型肝炎防治指南》（2015年更新版）解读［J］．北京医学，2015，37（12）：1186－1188．

［3］邵芳．HCV抗原、HCV抗体及HCV－RNA联合检测与ALT的相关性及其临床意义［J］．中国中西医结合消化杂志，2014，22（2）：81－82.

作者：孟繁君 王利新 王琦 单位：宁夏医科大学总医院心脑血管病医院