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姜组织培养范文

姜组织培养

姜为姜科多年生草本植物,根茎肉质,具芳香和辛辣气味。姜不仅是一种常用的蔬菜及调味品,还是一种常用的中药材,有发表、出汗、消痰、止呕、散风、祛寒、止泄、疏肝、导滞、解毒等功效[1]。近年研究表明,姜还具有抗肿瘤、抗氧化作用[2]。姜在生产上长期采用无性繁殖,易感染多种病毒,致使产量和品质降低,严重影响姜的生产和经济效益的提高。本试验通过组织培养技术,对姜进行脱病毒和复壮,探索了工厂化生产优质姜种源、种苗的可能性。

1材料

姜(ZingiberoffcindelRoscoe)的茎尖、幼芽。

2培养条件

基本培养基为MS。

诱导愈伤组织和芽培养基:①MS+NAA0.03mg/L+IAA0.03mg/L+KT0.2mg/L。

芽苗增殖培养基:②MS+NAA0.03mg/L+IAA0.03mg/L+KT0.2mg/L+6-BA0.05mg/L+2,4-D0.025mg/L;③MS+NAA0.03mg/L+IAA0.03mg/L+KT0.2mg/L+6-BA0.2mg/L;④MS+NAA0.03mg/L+IAA0.03mg/L+KT0.5mg/L。

生根培养液:⑤为自来水或干净河水(均不用灭菌处理)。

上述培养基均加入0.8%~0.9%琼脂、3%蔗糖,pH值为5.8~6.0。培养温度23±2℃,光照时间14~15h/d,光强30μmol/m2·s。生根培养也可以室内自然温度、自然光照下培养。

3生长与分化情况

3.1无菌材料的获得

2008年3月上旬从农户发酵厩肥堆中取出经高温发酵热处理(可杀灭部分姜病毒)催芽的姜块,掰取生有健壮芽的姜块,自来水充分冲洗干净,去泥砂,小心剥去芽外层叶鞘,在无菌超净工作台上,将姜块表面、芽周围用75%酒精棉球擦拭2遍,1%有效氯的次氯酸钠溶液浸泡灭菌30min,0.1%HgCl2浸泡灭菌10min,无菌水洗涤5~6次,无菌吸水纸吸干芽块表面水分,再次剥去外层芽鞘,切取0.5~1.0cm长的茎尖或幼芽,作为外植体。

3.2愈伤组织和芽的诱导

将外植体接种到培养基①上,30d后可见到白色、绿色愈伤组织及小芽,50d后见到多个胚状体及芽苗,芽苗高3~5cm,培养80d后芽苗高可达9.0cm。

3.3丛生芽的增殖

将上述芽苗从基部切取或分离(掰取),高于3cm的芽苗均截去上部叶及叶鞘,然后将芽苗接种到丛生芽增殖培养基②~④上,培养40d,可见到丛生的胚状体及芽苗。培养70~80d,形成多丛胚状体及芽苗3~7株,芽苗高3~9cm。这时,胚状体可一丛一丛地切取或分离,芽苗也可一株一株的切取或分离,繁殖系数为5~12。

增殖培养基②~④作用效果相差不大,只是培养基②芽苗叶色较绿,培养基④形成的胚状体及芽苗数稍多。

3.4生根与移栽

将5~9cm高的芽苗从基部分离或切取,转入盛生根培养液⑤的器皿中并固定,然后将器皿口用透明塑料膜或玻璃板盖上封闭,防芽苗因水分蒸发而萎蔫,每10~15d换液1次。培养20d后长出白色根突,30d后长出2~3条1~2cm白色幼根,这时可将塑料膜或玻璃板去掉,敞开器皿培养生根。培养40~50d后长出3~6条根,根长3~7cm,并明显见到密集白色根毛,生根率达99.5%以上。这时将生根苗取出直接移植于大棚的土壤中,成活率达99%以上。该生根方法的优点:①芽苗不污染,也无需无菌条件,克服了用琼脂等固体培养基生根易污染烂苗的难题;②方法简单,取材方便,成本低。

4结论

试验结果表明,通过组织培养与快速繁殖,对姜进行脱毒和复壮,可以克服无性繁殖易使姜感染病毒、致使产量和品质降低的缺点,为工厂化生产优质姜种源、种苗提供了一条有效途径。

姜芽苗增殖至5~9cm高生根,芽苗不污染,无需无菌条件,可直接于自来水或干净河水(不用灭菌处理)的生根培养液中生根,方法简单,取材方便,成本低,且克服了用琼脂等固体培养基生根易污染烂苗的难题,移栽成活率达99%以上。

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