碱性成纤维细胞因子对真皮下血管网皮瓣成活实验范文

作者：尹刚贾堂宏刘志功孙炳卫龚维明刘淑恒郭淑亚张庆国

【摘要】目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对促进随意型真皮下血管网皮瓣（SVNF）成活的作用。方法：分别在4只纯白色家猪两侧背部各形成6个SVNF，长16cm，宽4cm，将24个皮瓣随机分为bFGF组和对照组，于术后6d测量各组皮瓣成活率及皮瓣新生血管密度。结果：术后6d，bFGF组与对照组SVNF成活率分别为（81.2±1.7）%和（66.2±1.8）%(P＜0.05)，皮瓣近、中、远段皮瓣血管密度分别为（16.7±6.0）、(29.7±5.5)、（14.9±6.0）/mm2和（16.6±4.0）、（21.4±5.2）、（3.5±5.1）/mm2(P＜0.05)。大体观察和组织学观察bFGF组均优于对照组。结论：皮瓣下局部注射bFGF后，通过促进SVNF远端基底部和边缘部的血运，可以提高SVNF成活率，缩短皮瓣的断蒂时间，扩大皮瓣长宽比例。

【关键词】真皮・外科皮瓣・成纤维细胞生长因子2

BFGFimprovestheviabilityofsubdermalvascularnetworkflap

【ABSTRACT】Objective:ToinvestigatetheapplicationvalveofbFGFtoimprovetheviabilityofsubdermalvascularnetworkflap.Methods:Fourwhitehealthypigswereused,eachpighad6SVNFonback,16cm×4cm，totally24flapsweredividedrandomlyinto2groups:ThebFGFgroupsandthecontrolgroups.Onpostoperativeday6,weobservedtheappearanceoftheflaps.Thesurvivalareaofeachflapwasmeasuredandtheflapwasharvestedforhistologicalanalysisandthedensityofangiogenesiswasalsoexamined.Results:Onpostoperativeday6,thesurvivalratesofthebFGFgroupandthecontrolgroupwere(81.2±1.7)%and(66.2±1.8)%respectively,theangiogenesisdensityofthemiddleandthedistalsegmentinthebFGFgroupwas(16.7±6.0)/mm2,(29.7±5.5)/mm2,(14.9±6.0)/mm2respectively,while(16.6±4.0)/mm2,(21.4±5.2)/mm2,(3.5±5.1)/mm2respectivelyinthecontrolgroup.ThebFGFgroupwassuperiortothecontrolgroupintheappearanceandhistologicalanalysisoftheflaps.Conclusion:TheresultssuggestthattheinjectionofbFGFlocallycanpromotethesurvivalratebyacceleratingthebloodcirculationoftheSVNF’bottomandedge,shortenthedivisiontimeofSVNFandbroadentheratiooflengthandwidth.

【KEYWORDS】Dermis・Surgicalflap・Fibroblastgrowthfactor2

临床上经常见皮肤撕脱伤、热压伤、严重烧伤创面，早期良好的组织覆盖是外科修复的重要研究内容，对恢复患肢功能，保留良好的外观至关重要。随意型真皮下血管网皮瓣（subdermalvascularnetworkflap,SVNF）是近20年来新出现的一种皮瓣，此型皮瓣充分发挥了真皮下血管网的作用，广泛应用于创伤外科、烧伤整形美容外科，但其供血范围有一定限度，皮瓣长宽比例一般不超过2.5∶1，故而限制其推广应用。本实验采用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）皮瓣下局部注射给药，探讨bFGF能否提高SVNF的成活率，为临床应用提供依据。

1材料和方法

1.1实验动物纯白色3个月龄健康家猪4只（由山东大学动物实验中心提供），体重（20±2.5）kg，雌雄不限。

1.2动物模型的建立在每只家猪两侧背部形成6个SVNF，切断从腹乳线处发出的轴型血管后形成随意型皮瓣，长16cm，宽4cm。皮瓣长轴与猪的纵轴垂直。

1.3药物及给药方法bFGF购自东大生物工程公司。SVNF形成后，即刻在皮瓣距蒂部12cm、14cm处及皮瓣最远端分别选择6个注射点，给予皮下注射。处理如下：bFGF组：每一位点真皮下层注射含有bFGF的肝素化生理盐水0.1ml，共0.6ml。对照组：每一位点皮下注射0.1ml肝素化生理盐水，共0.6ml。药物注射后，将皮瓣原位缝合，皮瓣远段1/3打包加压包扎。家猪麻醉清醒后，单笼饲养，每日肌肉注射青霉素400万U预防感染。

1.4检测指标及方法

1.4.1大体观察术后6d将家猪再次全麻后拆除打包线，肉眼观察各组皮瓣

颜色，质地及猪毛生长情况。

1.4.2皮瓣成活率术后6d，用透明硫酸纸标记出皮瓣坏死区域和成活区域。应用计算机图像分析仪计算出各组皮瓣成活面积占总面积之比，即皮瓣成活率。

1.4.3组织学观察分别在皮瓣近、中、远1/3处切取1cm×1cm×1cm的组织块，包括皮下脂肪组织和少量肌肉组织，10%福尔马林固定，常规脱水，包埋，HE染色，光镜下观察组织学变化。

1.4.4血管密度检测采用SP免疫组化染色显示真皮下层新生的血管，然后利用10倍光镜，随机计算出每个组织切片中选出的5个视野中血管断面的个数。利用计算机图像自动处理系统计算出相同视野下的组织面积，即为1mm2组织中血管断面的密度。

1.5统计学处理求出每组皮瓣成活率及血管密度的x±s。实验测得的数据组间采用单因素方差分析比较，进行t检验。

2结果

2.1大体观察两组皮瓣近端呈粉白色，猪毛生长良好，质地柔软，用刀切割出血活跃。两组皮瓣中段为淡紫红色。bFGF组皮瓣远段呈粉白色，局部淡红色，有猪毛生长，对照组皮瓣远段部分发黑、结痂，无猪毛生长，质地硬，切割时不流血。

2.2皮瓣成活率术后6dSVNF成活率bFGF组为（81.2±1.7）%，对照组为（66.2±1.8）%(P＜0.05)。

2.3组织学观察术后6d对照组远段皮肤表皮层变偏平，真皮层细胞排列紊乱，胶原组织有断裂现象，真皮层和真皮下层新生的血管生长不活跃，有大量的中性粒细胞和巨噬细胞浸润。bFGF组皮瓣远段皮肤各层结构无明显改变，复层上皮细胞排列整齐，真皮层胶原组织无肿胀及断裂，真皮层和真皮下层新生小血管生长活跃，无明显炎症细胞浸润。

2.4血管密度检测术后6d，两组皮瓣远段新生血管密度见表1和图1-3。表1术后6d两组皮瓣血管密度比较（略）

3讨论

创面愈合过程包括炎症反应、血管再生、细胞移行、细胞增殖以及细胞外基质的重建，创面愈合受多种肽类生长因子的调控，这些因子通过自分泌和旁分泌的机制影响着创面愈合的进程，其中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在创面愈合中起重要作用。bFGF不仅能促进皮肤成纤维细胞、内皮细胞等与组织修复有关的细胞生长增殖反应外，而且还能刺激成纤维细胞分泌胶原蛋白等合成新的细胞外基质［1］。本实验结果表明，bFGF能够通过促进皮瓣远段血运重建，改善真皮下血管网皮瓣血供，促进皮瓣成活，缩短断蒂时间，继而提高SVNF的成活率。bFGF广泛存在于体内所有细胞中，其中脑垂体含量最高，其他组织仅为其含量1/10~1/50，细胞外基质（ECM）是bFGF的贮存库，细胞合成的bFGF释放入ECM,与其中的硫酸肝素结合是非活性状态，活性形式bFGF的释放必须依赖于肝素酶的降解，一般以为，这些严格的调控机制对于bFGF随时调节靶细胞的增殖和分泌对创伤组织的修复极为有利。bFGF有广泛的生物活性，不仅能促进靶细胞的有丝分裂，还有非有丝分裂的激素样效应，包括改变细胞趋化性，诱导或者抑制细胞合成，分泌一些特殊蛋白质和调节细胞的分化。诱导毛细血管的生长是bFGF的一个非常重要的功能，几乎在所有富含血管的组织中均含有bFGF。真皮下血管网的血供包括［2］：（1）蒂部血供。血供通过蒂部较小的肌皮穿支的分支进入真皮下血管网，到达皮瓣远端。（2）创基创缘血供。真皮下血管网充分暴露，与受区紧密接触，有利于血管网与受区早期建立交通，随着血管网逐步调整，原来的干血管被选择性的部分保留下来，起着重要供血渠道的作用。bFGF能促进皮瓣早期断蒂［3］，因为bFGF不仅有利于新生血管从受区基底部向皮瓣快速生长，还能加强基底与皮瓣间血管断端的直接吻合。在皮瓣转移后，新生血管尚未长入皮瓣组织，直接血管吻合可改善皮瓣血供，特别有利于处于存活与坏死交界区内的细胞向好的方向发展，对于皮瓣存活率的提高是有较大益处的。bFGF以肝素结合物的形式存在［4］，并以此形式与受体结合而产生生物学效应。肝素可提高其生物学活性，并可保护其不被各种理化因素灭活，外源性肝素有利于bFGF结合到靶细胞表面受体上，促进bFGF生理作用的发挥，故临床应用时应加入肝素化生理盐水以增加其活性。

参考文献

［1］丁小邦，程宁新，陈兵，等.应用bFGF刺激的软骨细胞构建自体组织工程化软骨的研究［J］.中华整形外科杂志，2004，3：217.

［2］肖添有，司徒朴，赵吉森.真皮下血管网皮瓣的基础研究进展［J］.中华整形烧伤杂志，1997，4：292.

［3］张强，蔡锦方，刘立峰，等.bFGFPLGA微球促进随意皮瓣早期断蒂［J］.中国矫形外科杂志，2004，12（5）：353355.

［4］赵焕童，李湘洲，王歧刚，等.碱性成纤维细胞生长因子对大鼠真皮下血管网皮片愈合的影响［M］.中国临床康复，2003，7（23）：31683169.新晨