鸦胆子油乳药理学论文范文

1材料与方法

1.1肿瘤接种选取传代6～8d，肿瘤生长良好、腹部隆起明显的小鼠，无菌条件下抽取腹水，用无菌生理盐水稀释细胞悬液。于倒置显微镜下计数后,将细胞浓度调整为1×107/mL。每只小鼠取0.2mL细胞悬液接种于右侧腋后线皮下，观察肿瘤生长。

1.2动物分组及给药选取造模成功小鼠，随机分为正常光节律组和异常光节律组。正常光节律组小鼠又随机分为模型组、阳性对照组、光照前期（6am）给药组、光照中期（2pm）给药组、暗期前期（10pm）给药组；异常光节律组小鼠又随机分为模型组、阳性对照组、光照前期（11pm）给药组、暗期中期（3pm）给药组、暗期前期（7am）给药组，每组15只。正常组、模型组每天腹腔注射生理盐水，给药组分别在设计时间腹腔注射鸦胆子油乳注射液（剂量为5mL/kg）。阳性对照组按体质量腹腔注射环磷酰胺（剂量为20mg/kg），各组均连续给药10d。治疗期间记录小鼠的毛色、体质量、小鼠死亡时间和数量。

1.3对实体瘤的抑制作用末次给药24h后，称量小鼠体质量，随后颈椎脱臼处死小鼠。剥取瘤块，称取质量，计算瘤体质量指数：w瘤质量指数=m瘤质量/mbody，以及肿瘤生长抑制率（%）：p抑制=（m模型组-m治疗组）/m模型组×100%。

1.4脏器指数的测定末次给药24h后，称量小鼠体质量，随后颈椎脱臼处死小鼠，剥取肝脏、肾脏、脾脏和胸腺，称取质量，计算脏器指数：p脏器指数=m脏器/mbody

1.5肝、肾功能指标的测定末次给药24h后，小鼠眼球取血，分离血清。按试剂盒步骤测定血清中ALT、AST、GGT、TP、Cr、BUN含量。

1.6统计方法所有结果均以均数±标准差（x±s）表示，均采用SPSS17.0软件进行统计。方差齐者，采用单因素方差分析；方差不齐者，采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1不同光节律对小鼠生长情况的影响正常光节律各组小鼠行为活动、毛发正常；而异常光节律各组小鼠行为较迟钝，进食较少，毛发光泽较暗，毛发松散。从第6天开始，各组陆续出现死亡。体质量生长曲线见图1。

2.2不同光节律对鸦胆子油乳抑瘤作用的影响表1结果显示：正常光节律下，各治疗组瘤体质量不同程度减少，瘤质量指数有所下降，其中阳性对照组、暗期前期给药组与模型组比较，差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。光节律改变后，与正常光节律比较，各治疗组瘤体质量均有所上升，瘤质量指数有所增加。异常光节律下，除光照前期给药组外，各治疗组瘤体质量及瘤质量指数均显著下降，与模型组比较差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。

2.3不同光节律对各组脏器指数的影响表2结果显示：正常光节律下，与模型组比较，暗期前期(10pm)给药组的肝脏指数显著下降（P<0.05），胸腺指数显著上升（P<0.05）。改变光节律后，各脏器指数均有所下降。异常光节律下，暗期前期(7am)给药组的脾脏指数显著升高，与模型组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.4不同光节律对各组肝功能指标的影响表3结果显示：正常光节律下，模型组AST水平与空白对照组比较显著上升（P<0.05），各治疗组AST，GGT水平有不同程度下降，其中阳性对照组的AST水平与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）。光节律改变后，与正常光节律比较，各组AST水平有所上升，但差异无统计学意义。异常光节律下，各治疗组AST水平有所下降，GGT水平有所上升。

2.5不同光节律对各组肾功能指标的影响表4结果显示：正常光节律下，模型组BUN、Cr水平与空白对照组比较显著下降（P<0.05），各治疗组BUN、Cr水平有所上升。改变光节律后，与正常光节律比较，各组BUN水平有所上升，Cr水平有所下降。异常光节律下，模型组BUN、Cr水平与空白对照组比较显著上升（P<0.05），各治疗组BUN水平除暗期中期给药组外，均有所下降；各治疗组Cr水平均有所下降。

3讨论

从本研究结果分析，采用H22肝癌细胞制备KM小鼠的肿瘤模型，经鸦胆子油乳注射液治疗后，在正常光节律和异常光节律下均可减小瘤体质量，降低瘤质量指数，具有一定的肿瘤抑制作用。

药物在正常光节律下给药，与异常光节律比较，瘤质量指数的下降幅度更为显著。相同光节律下，药物在暗相期给药，治疗效果更佳。国内外研究显示：生物体昼夜节律的失调，会影响调控细胞增殖的钟控基因（clock-controlledgenes，CCG），进而引起细胞周期的紊乱，最终导致肿瘤的加速生长。本研究结果显示：改变光节律后，与正常光节律比较，小鼠的行为和状态出现异常，瘤体质量、瘤质量指数均有所上升，表明昼夜节律的紊乱会加速肿瘤的生长。在相同光节律下，与暗相期治疗组比较，光照期治疗组瘤体质量增加，瘤质量指数更高。经鸦胆子油乳治疗后，2种光节律下各治疗组小鼠的瘤体质量均有所减小，瘤质量指数均有所降低，而且，在特定的时相（暗相期）下给药，药物的治疗效果更好。既肯定了药物本身的抗肿瘤作用，也可为日后的进一步研究提供参考。

另一方面，机体的免疫系统具有节律性。正常昼夜节律下，免疫系统中的某些成员在夜间的水平较高，往往容易出现峰值时相。免疫系统昼夜节律的改变，尤其是峰相位白细胞数与细胞因子浓度的回落，使得机体原有的免疫监视节律紊乱，不能有效地监视肿瘤细胞，从而使肿瘤细胞逃脱免疫监视，得以继续生长发展。ALT、AST、GGT是临床上检查肝功能的重要指标。当肝脏发生病变，如原发性肝癌时，由于肝细胞受到损伤等原因，使血清中3项指标水平出现不同程度的升高。BUN是人体蛋白质的主要终末产物，Cr主要由肌肉代谢产生，当肾小球滤过率明显下降时，血液中BUN和Cr才会明显升高，一般作为检查肾功能的重要指标［8］。本研究结果显示：2种光节律下的荷瘤小鼠AST、BUN、Cr水平均出现异常。改变光节律后，与正常光节律比较，荷瘤小鼠的脾脏、胸腺指数出现不同程度的下降，血清中AST、BUN水平有所升高。可以推断，昼夜节律的改变可能对免疫系统的某些环节产生影响，并可能会加重肝肾功能损伤。使用药物治疗后，脾脏、胸腺指数有所回升，部分治疗组的AST、BUN、Cr水平有所下降。

提示鸦胆子油乳的治疗作用可能与昼夜节律有关，其具体机制仍有待探讨。从中药中寻找既具有一定的抗肿瘤作用，又可以增强患者免疫系统，改善组织器官损伤的药物，正逐渐成为研究的热点。本研究采用时辰药理学概念，在2种不同的光节律影响下，观察鸦胆子油乳对H22肝癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及不同时相给药对药效的影响。结果表明鸦胆子油乳不仅具有一定的抗肿瘤作用，而且在特定时相下给药能增大药物的疗效，其化学成分明确，性质稳定，具有良好的实用价值和应用前景。

作者：李滨萍林曦廖嘉仪刘方乐熊天琴单位：广东省中医院药学部广州中医药大学