灵杆菌素生产工艺论文范文

1灵杆菌素的组成结构分析

1.1理化分析分别精密称取灵杆菌素（批号070627）和市售灵杆菌素（白天鹅产）各50mg，蒸馏水稀释至50mL，分别采用苯酚硫酸法、蒽酮硫酸法、莫氏试剂法、斐林试剂法、茚三酮法、双缩脲法、FeCl3法进行理化鉴别。（结果见2-3）

1.2灵杆菌素TLC分析[7,8]精确称取灵杆菌素（批号070627）0.025g溶于3mol/L的硫酸，用蒸馏水稀释至10mL，振荡溶解，密封置110℃烘箱中加热12h后，冷却至室温，加适量碳酸钡，4000r/min离心20min，取上清，用1mol/L氢氧化钠调至中性，浓缩后真空冷冻干燥。取干品0.050g，溶解并定容50mL，待其溶解，得灵杆菌素多糖水解液。取混合单糖溶液和多糖水解液各10μL，分别点样于硅胶GF254薄层板上，以正丁醇：乙酸乙酯：异丙醇：冰醋酸：水：吡啶=3：8.5：5.25：3：2.5：2.5为展开体系，室温展开。待展开剂前沿距板顶2cm时，取出，自然晾干，苯胺-二苯胺-磷酸显色剂，置于85℃烘箱内加热10min后观察现象。（结果见2-4）

1.3灵杆菌素HPLC分析[12-15]精密称取灵杆菌素（批号070627）适量，用去离子水配制成10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL四个浓度对照品溶液，0.22μm水膜过滤，备用；以10μg/mL大肠杆菌脂多糖为对照品，各取5μL进行HPLC分析。

2结果与讨论

2.1灵杆菌素生产工艺优化结果

2.1.1灵杆菌素提取工艺优化结果灵杆菌素提取工艺优化结果表明，以糖含量、蛋白含量及多糖提取效率综合评价结果显示，酚水法提取灵杆菌素效果显著，超声法在破壁效果上显著，因此在生产工艺中利用超声破壁，酚水法提取。

2.1.2灵杆菌素制备工艺优化结果灵杆菌素制备工艺优化结果表明破壁时间、菌体：苯酚液比、乙醇沉淀体积对灵杆菌素的多糖和蛋白含量均有影响，影响顺序分别为C＞B＞A和B＞C＞A，为了确保灵杆菌素收率，降低杂蛋白含量，最适工艺条件为：超声破碎时间为30min、菌体：45%苯酚液（g：v）比例为1：30、3倍体积95%乙醇沉淀。

2.2灵杆菌素的组成结构分析结果

2.2.1理化反应分析结果灵杆菌素理化分析结果表明，灵杆菌素与对照品相比在苯酚硫酸法、蒽酮硫酸法、莫氏试剂法、茚三酮法、双缩脲法等检测项中颜色反应一致，多糖特征反应明显，并有一定量的蛋白质。斐林试剂法和三氯化铁法颜色反应现象不一致，可初步断定市售样品中含有右旋糖苷、甘露醇等冻干制品赋形剂成分及工艺中有去除溶媒残留过程，因此不含有苯酚。

2.2.2TLC分析结果灵杆菌素水解液经薄层色谱分析呈现四个斑点，与对照品甘露糖、半乳糖、葡萄糖颜色（浅棕黄、深棕黄、黄色）和Rf（0.53、0.50、0.45）相一致，另外还有一个未知斑点（黄色，Rf为0.41），表明灵杆菌素是由多种单糖组成的多聚糖。

2.2.3灵杆菌素HPLC分析结果灵杆菌素经高效液相色谱法分析后出现明显脂多糖特征峰，且出峰时间基本一致，且峰面积与样品浓度间有明显的线性关系。

3结论

灵杆菌素自应用于临床研究以来受到了广大医药工作者和患者的青睐，经临床药理学研究广泛证明其对急慢性盆腔炎，附件炎，口腔粘膜病，银屑病，传染性肝炎，放化疗造成的白细胞减少症以及急慢性感染性疾病等均具有一定的效果。但是由于中国的制药企业处于起步阶段，生产制备过程仍然延续国外六七十年代的方法，生产过程中设备简陋、生产技术陈旧，从原料到提取过程没有进行严格的质量控制，同时没有注意到各学科之间的交叉互补，药学和免疫学等相关学科的前沿的分析手段和理念没有更好的为灵杆菌素的基础研究服务。同时，国家对灵杆菌素注射剂的质量标准还不完善，质量控制不严格，严重违反了临床应用过程中药品使用的安全、有效和可靠性的原则，导致副反应严重。所以本研究对灵杆菌素生产工艺进行优化，并对功效成分进行初步结构分析，希望为保证灵杆菌素的质量稳定和疗效的提高提供科研基础，为生化药品质量监管提供一些理论基础和特异性的手段、方法。

作者：杨晶杨秀峰殷微微安明显李璐孙皎单位：黑龙江农业职业技术学院